李娇娇
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
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- 分子伴侣幽门螺杆菌Hsp60与UreB的相互作用分析被引量：2
- 2016年
- 目的检测并分析幽门螺杆菌(Hp)尿素酶β亚基(UreB)与Hsp60之间的相互作用。方法克隆Hp 26695的尿素酶β亚基基因(UreB)融合GST标签和Hsp60基因融合His标签,分别在大肠埃希菌中进行异源表达。提取两种蛋白,采用pull-down方法检测两者间的相互作用。利用Modeller 9v2软件,以E.coli的GroEL为基础模建Hp Hsp60的三维结构,再与已知的UreB结构利用AutoDock 4.2软件进行分子共模拟,分析二者的相互作用面和关键氨基酸。结果构建了Hp Hsp60和尿素酶β亚基(UreB)的大肠埃希菌异源表达体系并获得纯化蛋白;Pull-down试验显示部分未融合GST标签的Hsp60出现在GST-UreB的洗脱液中,表明Hsp60与GST-UreB之间存在相互作用;以E.coli的GroEL为基础模建了Hp Hsp60的三维结构,利用docking技术构建UreB与Hp Hsp60的相互作用模型,发现其主要的相互作用面位于Hsp60的α9与UreB的α2之间,其可能形成氢键的关键位点为UreB的α2上的T147氨基酸与Hsp60的α9上的E237、K238。结论 Hp Hsp60能直接与尿素酶β亚基(UreB)相互作用,Hsp60可能通过这种相互作用在UreB成熟过程中发挥分子伴侣功能。这为阐明Hp尿素酶的组装与成熟机制奠定了基础。
- 赵慧琳季晓飞张艳丽柏雪莲李娇娇陈醒醒张玉梅李波清
- 关键词：幽门螺杆菌尿素酶HSP60分子伴侣相互作用
- 幽门螺杆菌hp0788基因对GES-1细胞功能影响的初步研究被引量：8
- 2017年
- 目的构建幽门螺杆菌ATCC26695hp0788基因敲除突变菌株(ATCC26695△0788km),观察hp0788基因对GES-1细胞功能的影响。方法以基因敲除质粒载体pSJHK构建基因敲除质粒,在hp0788基因的上下游分别扩增800~1100bp的基因片段作为同源臂,经限制性内切酶酶切后与质粒载体连接构建基因敲除质粒pSJHK-0788,通过电击转化构建hp0788基因敲除突变菌株,以FITC标记法检测其对GES-1细胞黏附能力的影响;以感染复数(MOI)为200:1构建幽门螺杆菌与GES-1细胞共培养体系,比较ATCC26695和ATCC26695△0788km对GES-1细胞凋亡及活性的影响。结果构建了hp0788基因双交换敲除质粒,电击转化获得hp0788基因敲除突变菌株。FITC标记ATCC26695和幽门螺杆菌ATCC26695△0788km与GES-1细胞混匀后采用流式细胞术检测FITC的荧光强度,ATCC26695组的黏附率记为100%,ATCC26695△0788km组黏附率为90.40%,差异均有统计学意义(t=2.80,P<0.05);ATCC26695与ATCC26695△0788km分别与GES-1细胞共培养8h和16h,流式细胞术检测细胞凋亡率分别为(15.73±7.84)%、(25.26±5.81)%和(12.46±12.30)%、(21.13±10.09)%,细胞增殖-毒性检测试剂盒检测细胞活力分别为53%、40%和66%、50%,差异均有统计学意义(t值分别为3.30,2.80,-2.93,-2.76,P<0.05)。结论hp0788基因敲除幽门螺杆菌ATCC26695对GES-1细胞的黏附率下降,并使GES-1凋亡率下降,而细胞活力增高。表明hp0788基因是影响幽门螺杆菌ATCC26695感染GES-1细胞后引起细胞凋亡和活性变化的重要基因。
- 李娇娇荣倩玉季晓飞张莹赵慧琳周秀芝李波清
- 关键词：幽门螺杆菌基因敲除细胞凋亡细胞活力
- 整合素β1亚基对幽门螺杆菌感染胃上皮细胞GES-1凋亡及增殖的影响被引量：3
- 2016年
- 目的分析幽门螺杆菌感染胃上皮细胞过程中整合素β1亚基表达的变化,观察整合素β1对幽门螺杆菌感染胃上皮细胞GES-1凋亡及增殖的影响。方法将幽门螺杆菌与胃上皮细胞GES-1共培养,采用流式细胞术检测整合素β1的表达量变化;应用iRNA技术降低胃上皮细胞GES-1中β1亚基的表达;幽门螺杆菌感染胃上皮细胞及iRNA降低β1的表达后,采用流式细胞术检测细胞的凋亡,采用CCK-8法检测细胞增殖情况。结果幽门螺杆菌感染胃上皮细胞12、24、48h后空白对照组凋亡率分别为(10.80±0.71)%、(12.23±0.06)%和(12.30±2.12)%,Hp感染组凋亡率分别为(24.20±0.14)%、(30.05±2.47)%和(26.40±1.91)%,差异均有统计学意义(t值分别为-26.28、-7.701和-12.855,P<0.05);与幽门螺杆菌共培养6、24、48h胃上皮细胞增殖受到抑制,抑制率分别为(35.00±3.22)%、(40.96±2.45)%和(8.00±3.33)%;幽门螺杆菌与胃上皮细胞GES-1共培养24、48h流式细胞术检测整合素β1表达,空白对照组平均荧光强度(MFI)分别为(1616.33±24.70)和(1834.67±17.01),Hp感染组为(1484.00±60.89)和(1376.00±14.11),差异有统计学意义(t值分别为3.488和35.95,P<0.05);应用iRNA技术降低胃上皮细胞GES-1整合素β1亚基表达24、48h,对照组凋亡率分别为(18.75±3.59)%和(39.75±3.68)%,iRNA组凋亡率分别为(26.25±4.11)%和(55.30±5.57)%,差异有统计学意义(t值为-2.746和-4.656,P<0.05);胃上皮细胞中β1亚基的表达降低后细胞增殖受到抑制,24、36、48、72h抑制率分别为(6.16±1.07)%、(17.15±2.76)%、(10.84±1.34)%和(21.87±1.72)%。结论幽门螺杆菌能降低胃上皮细胞GES-1整合素β1亚基的表达,而且可能通过降低整合素β1亚基的表达促进上皮细胞GES-1的凋亡并抑制其增殖。
- 陈醒醒张莹孙辉李娇娇张艳丽李波清
- 关键词：整合素Β1胃上皮细胞幽门螺杆菌IRNA
- LAIR-1 siRNA对幽门螺杆菌诱导单核细胞THP-1凋亡的影响被引量：4
- 2016年
- 目的研究LAIR-1基因沉默对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)诱导单核细胞THP-1凋亡的影响。方法以Hp ATCC26695分别感染THP-1细胞6、12、24和48h,采用流式细胞术检测细胞凋亡及LAIR-1蛋白的表达。应用Lipofectamine RNAiMAX转染3对LAIR-1siRNAs入单核细胞THP-1中,采用半定量RT-PCR及流式细胞术检测沉默效应,筛选出的较有效的一对siRNA再转染入单核细胞THP-1,48h后加入Hp培养24h,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Hp感染THP-1细胞6、12、24和48h后的细胞凋亡率分别为(84±1.77)%、(69.13±4.29)%、(48.3±3.37)%和(21.1±4.67)%,LAIR-1蛋白表达相对荧光强度分别为14 934±178、14 369±244、12 259±523和7438±539;转染后48h较有效的siRNA对LAIR-1mRNA及蛋白沉默效率分别为(39.1±4.67)%和(38.4±3.18)%;将筛选出的siRNA转染细胞48h后,用Hp感染24h,流式细胞仪检测显示转染组与阴性对照组细胞凋亡率分别为(56.1±9.8)%和(36.9±3.2)%,转染后感染组与空白组LAIR-1蛋白表达相对荧光强度分别为12 181±219和10 228±136。结论在Hp感染细胞THP-1 48h内,随着感染时间延长LAIR-1的表达及THP-1细胞凋亡率显著降低即LAIR-1siRNA能抑制LAIR-1的表达及THP-1细胞的凋亡。
- 孙辉张莹季晓飞陈醒醒李娇娇李波清
- 关键词：幽门螺杆菌单核细胞凋亡小分子干扰RNA
- C1q对幽门螺杆菌感染THP-1细胞分泌炎症相关因子的影响
- [目的]1.明确C1q在H.pylori感染THP-1细胞时对LAIR-1表达的调控作用。2.研究C1q在H.pylori感染THP-1细胞时对炎症相关细胞因子IL-4、IL-8和IL-10分泌的影响。3.研究C1q在H...
- 李娇娇
- 关键词：幽门螺杆菌C1QTHP-1细胞
- 文献传递
- 基于医疗费用控制的医保支付方式改革研究 ——以山东省为例
- “看病贵、看病难”问题是我国人民群众最关心的问题之一。为解决人民群众“看病难、看病贵”的问题,我国采取了一系列的措施如“整合城乡居民医保、改革医保支付方式、建立分级诊疗制度、医联体建设等”。但是,我国卫生总费用相对于经济...
- 李娇娇
- 文献传递
- 幽门螺杆菌在两种液体培养基中生长规律的探讨被引量：4
- 2017年
- 目的分别用血清脑心浸液和β-环糊精脑心浸液两种培养基培养幽门螺杆菌,观察幽门螺杆菌在两种培养基中的生长规律。方法将幽门螺杆菌分别接种于血清脑心浸液和β-环糊精脑心浸液中,置37℃微需氧环境以120r/min震摇培养,于不同时间点以稀释平板计数法计数活菌数量,制作生长曲线。结果幽门螺杆菌在血清脑心浸液和β-环糊精脑心浸液中的迟缓期均为10h,对数期分别为45h和40h,对数中期时比生长速率分别为0.058/h和0.043/h,稳定期分别为15h和20h,最高浓度分别为2.067×10~8 CFU/ml和1.378×10~8 CFU/ml。结论幽门螺杆菌在血清脑心浸液和β-环糊精脑心浸液中均生长良好,其中在血清脑心浸液中最高生长密度更大,对数期维持时间较长。
- 荣倩玉李娇娇季晓飞张莹耿丽李波清
- 关键词：幽门螺杆菌Β-环糊精血清
