李海
- 作品数：12 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家重点实验室开放基金哈尔滨市科技创新人才研究专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- NDV或H9N2 AIV感染对坦布苏病毒继发感染宿主单核-巨噬细胞的影响
- 2022年
- 为研究新城疫病毒(NDV)或H9N2禽流感病毒(AIV)对坦布苏病毒(TMUV)继发感染宿主单核-巨噬细胞的影响及其潜在机制,试验通过实时荧光定量PCR方法检测NDV或H9N2 AIV预先感染鸭单核-巨噬细胞和HD11细胞后再感染TMUV 12,24小时时的TMUV基因组拷贝数,分析是否可用HD11细胞替代鸭单核-巨噬细胞进行后续试验;分别通过高分辨率活细胞共聚焦显微镜和ELISA检测NDV和H9N2 AIV感染12,24 h对HD11细胞中活性氧(ROS)和Ⅰ型干扰素(IFN)含量的影响;通过实时荧光定量PCR方法分别检测PMA、外源Ⅰ型IFN与细胞共孵育后,感染TMUV 12,24小时时ROS和24小时时Ⅰ型IFN对TMUV基因组在细胞中复制的影响。结果表明:感染12,24小时时,在鸭单核-巨噬细胞中,NDV混合感染组的TMUV基因组拷贝数极显著低于TMUV单独感染组(P<0.01);感染12,24小时,H9N2 AIV混合感染组的TMUV基因组拷贝数分别显著和极显著低于TMUV单独感染组(P<0.05,P<0.01)。在HD11细胞中,NDV混合感染组的TMUV基因组拷贝数分别显著和极显著低于TMUV单独感染组(P<0.05,P<0.01);H9N2 AIV混合感染组的TMUV基因组拷贝数极显著低于TMUV单独感染组(P<0.01)。感染12,24小时时,NDV和H9N2 AIV均可极显著提高HD11细胞中ROS的含量(P<0.01)。感染24小时时,NDV可显著提高IFN-α的含量(P<0.05),感染12,24小时时,NDV可极显著提高IFN-β的含量(P<0.01);H9N2 AIV可在感染12,24小时时极显著提高IFN-β的含量(P<0.01)。ROS可在感染TMUV 12,24小时时极显著抑制TMUV基因组的复制(P<0.01),Ⅰ型IFN可在感染TMUV 24小时时显著抑制TMUV基因组的复制(P<0.05)。说明可用HD11细胞替代鸭单核-巨噬细胞进行后续试验;在鸭单核-巨噬细胞中,NDV或H9N2 AIV感染均可以有效抑制TMUV基因组的复制,其作用可能是通过提高ROS和Ⅰ型IFN含量实现的。
- 张艳慧马勇梁雨萌崔露陈志杰李雪峰胥利刘柘一刘胜旺李海
- 关键词：新城疫病毒单核-巨噬细胞
- 猪戊型肝炎病毒样颗粒的制备及其应用
- <正>由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)导致的疾病日渐引起人们的关注。戊型肝炎在临床上的表现与甲型肝炎类似,主要以感染青壮年为主,病死率小于1%,但是孕妇感染HEV的病死率可高达28%,特别是妊...
- 李海王刚张交儿何希君刘永刚姜成刚王淑杰涂亚斌蔡雪辉
- 关键词：病毒样颗粒发酵工艺抗原性免疫原性
- 文献传递
- 猪戊型肝炎病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立被引量：2
- 2016年
- 为建立猪戊型肝炎病毒(SHEV)的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究根据SHEV基因ORF2保守区设计引物及探针,并对PCR反应条件进行优化。结果表明,该方法扩增的相关系数可达0.999,在102拷贝/μL^109拷贝/μL内具有良好的线性关系。对猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和伪狂犬病毒的RNA或DNA进行检测,结果均为阴性。该方法可以检出最低拷贝数为10拷贝/μL。重复性试验结果表明该方法的批内和批间变异系数均小于3.0%。本研究使用该荧光定量PCR检测方法对黑龙江省临床收集的131份样品(肝脏45份、粪便86份)进行检测,总阳性率为11.45%,其中肝脏阳性率为22.22%,粪便阳性率为5.81%。该方法的建立为SHEV的快速检出及绝对定量奠定了良好的基础。
- 闫蕾涂亚斌李海张交儿王刚刘永刚陈志宝蔡雪辉
- 关键词：猪戊型肝炎病毒荧光定量PCRTAQMAN探针
- 新城疫病毒复制对其溶瘤作用影响的初步分析
- 2020年
- 本研究旨在明确新城疫病毒(NDV)溶瘤作用是否依赖其复制水平,并改进NDV溶瘤机制研究模型。以NDV疫苗株LaSota感染人肿瘤细胞系HCT116、A549和人非肿瘤细胞系HEK293T为研究模型;RT-qPCR检测NDV在各细胞系的基因组复制水平;Western blot检测NDV在各细胞系的蛋白表达水平;利用流式细胞术检测NDV感染对各细胞系的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果表明,NDV在三个细胞系内的基因组复制水平和蛋白表达水平没有显著差异,但对三个细胞系的溶瘤作用存在明显差异;进一步流式细胞术检测发现,NDV感染能诱发HEK293T和HCT116的细胞周期发生G1期停滞,但对A549的细胞周期没有明显影响;此外,NDV感染24 h后,A549细胞以早期凋亡为主,而HCT116细胞以坏死/晚期细胞凋亡为主。NDV的溶瘤作用并不依赖于其复制水平,而且NDV对不同类型肿瘤细胞的溶瘤作用存在不同机制。
- 吴寒光孙军峰梁雨萌刘胜旺李海
- 关键词：新城疫病毒溶瘤病毒细胞周期
- 坦布苏病毒Du/CH/LSD/110128株原代毒及其鸡胚传代致弱毒在不同物种细胞中毒性和增殖能力的检测被引量：1
- 2020年
- 为了寻找坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)致病机制的研究模型,试验利用实时荧光定量PCR技术检测坦布苏病毒Du/CH/LSD/110128株原代毒CF1及其鸡胚传代致弱毒CF100在不同物种细胞中的增殖情况,并将CF1与CF100分别在鸭胚中传代以检测病毒对鸭胚的损伤情况。结果表明:CF1可在禽类细胞、哺乳类细胞中增殖,但不引起细胞损伤,CF100在禽类细胞、哺乳类细胞中不能增殖,只能在Vero细胞中增殖,且不引起细胞损伤;CF1和CF100在鸭胚中传代发现,传代CF1的鸭胚全身出现明显的出血,但传代CF100的鸭胚未见出血。说明相对于原代毒CF1,鸡胚传代毒CF100对细胞、鸭胚的损伤均降低,具有一定的安全性,可作为坦布苏病毒致病机制的研究模型。
- 梁雨萌马勇陈志杰吴寒光刘胜旺李海
- 关键词：病毒增殖
- SU6656对鸡传染性喉气管炎病毒与宿主细胞互作分子网络的影响被引量：2
- 2017年
- 为探索SU6656对鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染的影响及调控机制,本研究应用鸡LMH细胞系感染ILTV LJS09株作为实验模型,测定了SU6656对ILTV增殖和毒力的影响,通过高通量RNA测序技术(RNA-Seq)在全基因组范围内检测宿主细胞基因转录谱表达,并利用荧光定量PCR对部分差异表达基因进行验证。进一步的GO功能分析显示,在宿主细胞应答ILTV感染过程中,SU6656所调控基因主要涉及氢离子跨膜运输、辅酶Q的结合、Fe^(2+)和S^(2+)聚集等功能。KEGG通路分析表明,氧化磷酸化通路在SU6656调控ILTV感染的过程中可能发挥重要作用。本研究为进一步解析ILTV感染及致病机制提供了重要依据。
- 高琦李海闻晓波刘胜旺冉旭华
- 关键词：传染性喉气管炎病毒RNA-SEQ
- PFT-α对鸡传染性喉气管炎病毒侵染宿主细胞的影响
- 2018年
- [目的]研究抑癌基因p53小分子抑制剂PFT-α对ILTV侵染宿主细胞的影响。[方法]用PFT-α处理LMH(鸡肝癌细胞),通过结晶紫染色技术检测细胞感染ILTV 24 h后的细胞死亡情况,通过流式细胞术检测PFT-α对ILTV吸附、进入LMH细胞的影响,通过倒置荧光显微镜和高内涵细胞筛选系统检测PFT-α对ILTV在细胞间扩散的影响。[结果]结晶紫染色表明,PFT-α促进了ILTV感染后的细胞死亡,流式细胞术结果表明,PFT-α对ILTV吸附细胞没有影响,但是促进了ILTV进入细胞。同时,倒置荧光显微镜和高内涵细胞筛选系统检测结果表明,PFT-α对ILTV在细胞间扩散没有影响。[结论]研究初步检测了PFT-α对ILTV侵染LMH细胞过程的影响,为进一步研究ILTV与宿主互作过程提供了理论补充。
- 孙邦耀邵昱昊高琦李海刘胜旺
- 关键词：传染性喉气管炎病毒
- 猪戊型肝炎病毒样颗粒的制备及其应用
- 由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)导致的疾病日渐引起人们的关注。戊型肝炎在临床上的表现与甲型肝炎类似,主要以感染青壮年为主,病死率小于1%,但是孕妇感染HEV的病死率可高达28%,特别是妊娠末三...
- 李海王刚张交儿何希君刘永刚姜成刚王淑杰涂亚斌蔡雪辉
- 应用Gelatin和3D培养验证细胞粘附对传染性支气管炎病毒在体外培养细胞中增殖的影响
- 2018年
- 除传染性支气管炎病毒(IBV) Beaudette株外,其它IBV均难以在体外细胞系中传代培养。为研究限制IBV体外传代培养的影响因素,本研究应用流式细胞术检测IBV经典株M41囊膜与宿主细胞膜融合程度,结果显示M41可以在体外培养条件下侵入鸡细胞系LMH和DF-1,但荧光定量PCR检测显示侵入的M41无法增殖。进一步通过对比分析M41易感组织气管、非易感组织脾脏及LMH细胞全基因组转录谱数据,结果显示宿主细胞粘附、细胞周期、p53及SRC可能是M41在体外培养细胞中增殖的宿主决定因素。本研究通过在2D培养体系中预先孵育Gelatin和3D培养两种方式来调节细胞粘附的物理环境,结果显示两种方法均可以促进M41在体外培养细胞中的增殖;利用多种经典的细胞周期抑制剂及p53和SRC活性调控分子预先处理LMH和DF1,显示细胞周期、p53活性及SRC活性对IBV体外增殖无显著影响。表明细胞粘附特性是影响IBV体外增殖的重要因素。本研究为IBV体外细胞培养体系的建立奠定了实验基础。
- 王娜娜韩宗玺山丹邵昱昊刘胜旺李海
- 关键词：传染性支气管炎病毒病毒增殖
- 猪戊型肝炎病毒黑龙江分离株SWHLJ-BXBX全基因组序列的测定与分析
- 2017年
- 为了研究猪戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)黑龙江分离株SWHLJ-BXBX的全基因组序列,并对其序列特征和进化关系进行分析,试验采用RT-n PCR、5'-RACE、3'-RACE方法和Megalign、MEGA 6等生物学软件对SWHLJ-BXBX的全基因组序列进行了研究。结果表明:SWHLJ-BXBX全基因组序列去除poly A后全长为7 240 bp,5'UTR有25个碱基,3'UTR全长为70 bp,ORF1编码1 707个氨基酸,ORF2编码674个氨基酸,ORF3编码114个氨基酸,进化树分析表明SWHLJBXBX属于HEVⅣd基因亚型。
- 李海王刚张交儿何希君刘永刚姜成刚王淑杰涂亚斌蔡雪辉
- 关键词：进化树
