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宿主细胞erp57基因敲除抑制流感病毒复制的研究被引量：1: 2016年; ERp57是细胞内质网内的蛋白二硫键异构酶家族成员,可以催化蛋白二硫键的合成以促进蛋白折叠。为研究erp57基因敲除对流感病毒复制的影响,本研究通过CRISPR/Cas9技术构建了erp57基因的向导RNA(g RNA)敲除质粒p GEM-erp57g RNA,并将其与p Cas9-EGFP共转染至人肺腺癌细胞A549中,采用流式分选及限制性稀释的方法筛选单细胞克隆株,通过靶基因组测序及western blot检测,筛选获得了erp57基因敲除的A549细胞系。erp57基因敲除细胞系与野生型细胞生长动力学无显著差异。此外,将H1N1亚型流感病毒分别感染野生型和erp57基因敲除细胞系以测定erp57基因敲除对流感病毒复制水平的影响。结果显示流感病毒在erp57基因敲除细胞中的复制显著地受到了抑制,表明ERp57是流感病毒复制过程中的一个关键蛋白。本研究为开发新的抗流感病毒手段提供了相关的实验依据。; 胡丹王斌冷有龙王玉杰于群郑永辉范春玲; 关键词：基因敲除流感病毒

埃博拉病毒GP2蛋白N-糖基化调控蛋白成熟的机制研究: <正>埃博拉病毒(EBOV)感染人类及其他灵长类动物的致死率可高达90%,目前尚没有特效药物供临床使用。病毒粒子表面的囊膜蛋白GP在介导病毒入侵过程中发挥重要作用,但其依靠宿主细胞完成自身成熟的具体机制仍不明确。本研究发...; 王斌王玉杰郑永辉; 关键词：埃博拉病毒 N-糖基化; 文献传递

整合埃博拉病毒囊膜蛋白的伪病毒的构建: 2015年; 埃博拉病毒(EBOV)是一种能够引起人类和灵长类动物的烈性出血热的病原体,致死率高达90%。对该病毒活病毒的操作仅能够在生物安全4级实验室进行,高级别的生物安全要求限制了病毒的研究。为建立一个能够表达EBOV囊膜蛋白(GP)的伪病毒,本研究利用表达GP基因的重组质粒,与囊膜蛋白缺失、表达绿色荧光蛋白(GFP)的人免疫缺陷病病毒1型(HIV-1)基因组的重组质粒共转染人胚胎肾细胞(293T),以包装整合含有囊膜蛋白的伪型EBOV。结果表明,EBOV GP蛋白能够正确组装至HIV-1病毒表面;利用组装的伪型病毒粒子感染293T、人宫颈癌细胞(Hela)、人骨肉瘤细胞(Ghost)和非洲绿猴肾细胞(Vero)几种细胞系,结果显示在不同细胞系中均可检测到GFP蛋白的表达,表明组装的伪型病毒可以模拟野生型病毒感染相关细胞。本研究构建的伪型EBOV作为活病毒的替代工具,为研究EBOV的感染机制及中和抗体的筛选提供了一个良好的平台。; 王玉杰王斌时静胡丹于群郑永辉; 关键词：埃博拉病毒囊膜蛋白

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王玉杰