许诺
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：沈阳农业大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 慢病毒介导EGFP在小鼠胚胎的体外表达
- 2016年
- 为探讨3种感染方法对不同发育阶段胚胎中EGFP基因表达影响,利用透明带下注射法、胞质内注射法及透明带切口与慢病毒共培养法感染1-细胞期小鼠胚胎,分别提取以上3种方法感染慢病毒的不同发育阶段胚胎的EGPF基因,并以其为模板,扩增出630bp的EGPF基因片段。结果表明:慢病毒转染后在不同发育阶段的胚胎中,均扩增出EGFP目的片段(630bp)。当透明带下注射病毒时,90p L注射组(C组)和60p L注射组(B组)的EGFP基因阳性率显著优于30p L注射组(A组)(p<0.05)。当胞质注射病毒时,C组显著优于其他组(p<0.05),但胚胎发育的后期A组和B组差异不显著(p>0.05)。透明带做切口的胚胎与含不同浓度慢病毒共培养时,从1-细胞期到4-细胞期胚胎为止组间差异不显著(p>0.05),而胚胎发育的后期2×103cfu·μL^(-1)组和3×103cfu·μL^(-1)组均极显著优于1×103cfu·μL^(-1)组(p<0.01),但2×103cfu·μL^(-1)组和3×103cfu·μL^(-1)组间差异不显著(p>0.05)。透明带下注射慢病毒与胞质内注射慢病毒时,注射90p L(病毒滴度3×103cfu·μL^(-1))组的EGFP基因体外表达效果最好;透明带做切口的胚胎与含不同浓度慢病毒共培养时,在3×103cfu·μL^(-1)滴度培养液中培养的EGFP基因体外表达效果最好。
- 许诺贾俊龙王维朱玉博王雪晗白文林罗光彬
- 关键词：慢病毒胚胎EGFP体外表达
- 慢病毒包装体系的建立与体外表达被引量：2
- 2016年
- 为筛选出最佳的慢病毒转染处理时间,研究三质粒对慢病毒包装的最佳浓度配比,以及对293T细胞的细胞转染率和滴度,通过脂质体与Fugw质粒混合后转染293T细胞,观察293T细胞的形态和荧光表达量。结果表明:转染6h组的细胞形态略好于8h;转染8h组和6h组的转染率均极显著高于10h组(p<0.01),但彼此间差异不显著(p>0.05);质粒配比为4:3:2时,慢病毒滴度最高,达3.795×107TU·m L-1,经离心后滴度与离心之前相比能提高100倍。不同浓度的质粒配比对293T细胞转染率和滴度方面,B组(4∶3∶2)的转染率最高、C组(3∶2∶1)最低、A组(5∶4∶3)介于二者之间,3组间彼此差异极显著(p<0.01);转染后B组的滴度极显著高于A组和C组(p<0.01),而A组和C组间差异不显著(p>0.05)。感染293T靶细胞存在EGFP基因表达。利用10μL脂质体2000介导4μg的Fugw质粒转染293T细胞的最佳时间为6h;当Fugw∶△8.2∶Vsvg为4∶3∶2时,慢病毒转染293T细胞的效果最好。
- 王雪晗贾俊龙王维朱玉博许诺白文林罗光彬
- 关键词：慢病毒转染293T细胞滴度
