刘健
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：山东大学附属省立医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省医药卫生科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用Cre-loxP系统构建表皮细胞中p75神经营养因子受体基因条件性敲除小鼠模型及其鉴定被引量：1
- 2019年
- 目的应用Cre-loxP系统构建表皮细胞中p75神经营养因子受体(p75NTR )基因条件性敲除的小鼠模型并进行鉴定。方法应用Cre-loxP系统将5只6~8周龄雌雄不限(用于繁殖的小鼠鼠龄和性别下同)p75NTRflox/flox转基因C57BL/6J小鼠和5只角蛋白14启动子驱动(KRT14-)Cre+/-转基因C57BL/6J小鼠进行饲养和杂交。从繁育产生的第1代小鼠中筛选出5只p75NTRflox/+·KRT14-Cre+/-小鼠与5只p75NTRflox/flox小鼠进行交配,获得第2代小鼠。第2代小鼠出生20~25d,切取每只小鼠鼠尾,通过PCR法进行基因型鉴定。分别选取经鉴定后生长至6周龄的p75NTR基因完全条件性敲除小鼠、野生型小鼠各4只处死,切取腹部皮肤组织和脑组织,经免疫组织化学染色对比观察p75NTR在2种小鼠2种组织中的表达情况;另切取腹部皮肤组织,经苏木精-伊红染色观察2种小鼠组织形态学变化。结果(1)共繁育第2代小鼠20只,其中4只小鼠基因型为p75NTRflox/flox·KRT14-Cre+/-(p75NTR-/-),即p75NTR基因完全条件性敲除小鼠;5只小鼠基因型为p75NTRflox/+·KRT14-Cre+/-,即p75NTR基因部分条件性敲除小鼠;5只小鼠基因型为p75NTRflox/flox·KRT14-Cre-/-,6只小鼠基因型为p75NTRflox/+·KRT14-Cre-/-,均为野生型小鼠。(2)p75NTR基因完全条件性敲除小鼠皮肤表皮组织中未见p75NTR表达,野生型小鼠皮肤表皮组织中可见较多p75NTR阳性表达;p75NTR基因完全条件性敲除小鼠和野生型小鼠脑组织中均有丰富p75NTR阳性表达。(3)p75NTR基因完全条件性敲除小鼠和野生型小鼠皮肤表皮组织均无生长异常情况且毛囊结构均完整。结论应用Cre-loxP系统能够成功构建表皮细胞中p75NTR基因条件性敲除小鼠模型且小鼠皮肤组织形态无明显变化。
- 孙睿曹永倩马嘉旭殷思源张敏宋茹江杭高岩张华宇冯璋刘健刘振兴王一兵
- 关键词：角蛋白14表皮细胞
- 正、反义VEGF基因转染对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖行为的影响
- 2011年
- 目的探讨正、反义血管内皮生长因子(VEGF)基因对人增生性瘢痕成纤维细胞(HHSFb)增殖行为的影响。方法采用组织块法获取HHSFb,行细胞免疫化学鉴定。构建靶向VEGF基因pcDNA3.1(+)/hVEGF165(正义组)、pcDNA3.1(-)/hVEGF165(反义组)和空质粒pcDNA3.1(+)(空载体组)转染人成纤维细胞,以及未行转染处理的人成纤维细胞(对照组),共设为4组。经G418筛选获得阳性转染细胞克隆。逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)显示VEGF基因在细胞内的表达,上清行酶联免疫吸附反应(ELISA)检测VEGF蛋白表达水平,MTT测定细胞体外生长情况。结果成功构建正、反义VEGF基因表达载体。经统计学分析,与对照组和空载体相比,正义组VEGF mRNA表达增强,蛋白表达增强;反义组VEGF mRNA表达明显减弱,蛋白表达明显降低。MTT结果显示,转染前后细胞体外生长速度基本一致。结论正义VEGF基因重组质粒对HHSFb内源性VEGF的表达有促进作用,反义VEGF基因重组质粒可有效抑制HHSFb内源性VEGF的表达。
- 刘健王法刚曹永倩徐倩徐荣建
- 关键词：增生性瘢痕成纤维细胞血管内皮生长因子
