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Dicer干预对HPV18 E6/E7基因表达的影响被引量：1: 2013年; 目的:探讨Dicer干预对高危型HPV18 E6、E7基因表达的影响。方法:设计并合成三条Dicer基因的siRNA,采用定量PCR分析siRNA在不同浓度(40 nmol/L、60 nmol/L及80 nmol/L)、不同时间(24 h、48 h及72 h)干预效果的基础上,通过定量PCR分析Dicer被干预后对HPV18 E6、E7及miR-16基因表达的影响。结果:本研究建立的定量PCR能特异地检测Dicer、HPV18 E6、E7及miR-16基因的表达。设计的三种siRNA均明显下调Dicer基因表达,40 nmol/L的siRNA干预24 h即可获得明显效果。在此基础上分析对miR-16及高危型HPV18 E6、E7表达的影响,结果显示,40 nmol/L的Dicer siRNA干预可明显下调HPV18 E6、E7及miR-16基因表达(P<0.05)。生物信息学分析提示,HPV18 E6、E7基因编码区存在miR-16的结合位点。结论:Dicer siRNA干预能明显下调高危型HPV18E6、E7基因表达,miR-16可能参与HPV18E6、E7基因表达调控。; 林茂卢徐涟胡飞红胡芝吕艳冯娟张丽芳薛向阳; 关键词：宫颈肿瘤早期基因微RNA

miR-133a在急性髓系细胞白血病中的表达及意义被引量：2: 2012年; 目的:探讨miR-133a在急性髓系细胞白血病(AML)骨髓有核细胞中的表达及意义。方法:收集37例AML初诊患者及25例化疗后完全缓解患者、12例急性淋巴细胞白血病(ALL)初诊患者和22例骨髓象正常的发热患者的骨髓标本。分离有核细胞,抽提总RNA,以U6为内参,采用实时荧光定量茎环RT-PCR检测并比较AML、ALL及骨髓象正常的非白血病患者骨髓有核细胞中miR-133a的表达,同时比较miR-133a在AML常见亚型及化疗缓解前后的表达水平。结果:miR-133a在AML初诊患者骨髓中相对表达量(N=2-△Ct)明显高于ALL和非白血病患者(P<0.05);M3、M4及M5三种常见AML类型中,M5患者的骨髓标本miR-133a表达明显高于M3患者(P<0.05);AML化疗完全缓解后骨髓有核细胞中miR-133a的表达较化疗前明显下降(P<0.05)。结论:miR-133a可能参与AML的发生发展进程,其骨髓表达水平可为化疗敏感性评价提供一个新的指标。; 吕艳薛向阳林茂王冰冰李宝青王志斌张丽芳; 关键词：微小RNA

乙型肝炎病毒C基因多态性及其蛋白特性分析: 2012年; 目的:调查温州医学院大学生人群乙型肝炎病毒(HBV)C基因多态性及其HBc蛋白特性变化,为了解乙肝病毒核心抗原(HBcAg)变异提供理论依据。方法:采用HBV-C基因特异性引物对21份温州医学院大学生HBV携带者(血清学检测为大三阳患者)血清标本进行PCR扩增鉴定,并取19份PCR检测阳性产物直接测序;进一步用Vector NTI 8.0和DNA Star软件分析HBV-C基因多态性及HBc蛋白特性的变化。结果:21份标本中,HBV-C DNA阳性率达90.48%(19/21),与标准基因序列(Gen Bank X01587)比较,HBV-C基因同源性为93.3%～95.1%。HBV-C基因分别形成51种突变模式,其中一处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也发生了相应的改变,此处氨基酸序列的第130处脯氨酸(Pro)突变为苏氨酸(Thr),其余标本均为同义突变;但突变处编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性与标准株相比较无明显变化。结论:温州医学院大学生HBV携带者的HBV C基因具有多态性,但是由C基因决定的核心蛋白序列相对保守。; 冯娟吕艳陈昊涂建欣朱珊丽薛向阳张丽芳; 关键词：乙型肝炎病毒 C基因突变多态性

沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位免疫血清中和活性分析被引量：1: 2012年; 目的:制备高效价E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)168多表位特异性免疫血清并研究其免疫学特性。方法:纯化的Trx-his/Ct MOMP168融合蛋白经弗氏佐剂乳化后,小鼠背部皮下多点免疫注射,间隔2周后加强免疫,共3次,并分别于免疫前和每次免疫后2周取血,采用ELISA法检测血清融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体水平及变化趋势,通过体外中和反应检测多表位特异性血清的免疫学特性。结果:小鼠用Ct MOMP168多表位融合蛋白全程免疫后产生了抗融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体,ELISA法检测最高滴度达1:500。ELISA和体外中和实验检测结果显示,该抗体能特异性识别MOMP多表位蛋白和E型Ct全菌体,并能有效抑制E型Ct感染Hela229细胞。结论:沙眼衣原体MOMP多表位融合蛋白免疫血清可特异性结合并中和E型Ct。; 陈昊巩文词陈江冯娟吕艳朱珊丽陈向敏薛向阳张丽芳; 关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白表位

沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位重组DNA诱导小鼠体液免疫有效剂量的探讨: 2012年; 目的:探讨沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位(Ct MOMP168)重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168免疫小鼠的有效免疫剂量,为体内免疫学效应的研究提供实验依据。方法:在重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168构建成功的基础上,抽提纯化质粒,分3个免疫剂量组,即50、100和150μg剂量组,同时设PBS对照组。肌肉注射免疫BALB/c小鼠3次,间隔2周,于免疫的0、2、4、6、8周分别尾静脉取血,分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清中Ct MOMP多表位特异性抗体IgG的生成量,并于0、1、3、5、7周取小鼠阴道冲洗物,检测Ct MOMP多表位特异性SIgA的生成量,分别进行统计学分析。结果:3个不同免疫剂量组,血清特异性抗体IgG生成量于免疫第4周后均开始随免疫时间延长而逐步增加,150μg剂量组抗体IgG的生成水平高于其他剂量组(P<0.05)。免疫小鼠阴道分泌物中特异性抗体SIgA生成较快,免疫开始后1周,150μg剂量组SIgA的产生水平高于其他组,7周后SIgA开始下降,但150μg剂量组抗体水平仍高于其他剂量组(P<0.05)。结论:重组质粒DNA免疫小鼠的特异性抗体生成显示了剂量依赖关系,高剂量(150μg)免疫组小鼠血清特异性抗体IgG和阴道分泌性特异性抗体SIgA生成水平优势显著。; 饶品欢石朝晖李文姝吕艳陈向敏朱珊丽张丽芳; 关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白 DNA免疫免疫剂量小鼠

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吕艳

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