孙晓庆
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 布氏杆菌外膜蛋白D15的克隆表达及生物学活性分析
- 本实验通过PCR技术扩增牛型布氏杆菌外膜蛋白基因D15,将D15全长克隆至表达载体pCold TF中,构建重组表达质粒pCold TF-D15,转化大肠杆菌BL21（DE3）后,在IPTG诱导下表达大小约为130Ku的融...
- 孙晓庆韩先干童永亮宋军丁铲胡青海于圣青
- 关键词：外膜蛋白生物学特性
- 文献传递
- 牛型布氏杆菌铁离子转运蛋白的克隆鉴定及其生物学特性研究
- 对BfuA进行了克隆、表达及多抗的制备，ELISA和Western blot结果均为阳性，表明了该蛋白具有良好的免疫原性并确实表达于布氏杆菌的感染过程中，为进一步研究BfuA的功能和基于BfuA开发布氏杆菌的诊断抗原和亚...
- 孙晓庆韩先干童永亮何亮丁铲胡青海丁家波于圣青
- 关键词：铁离子转运蛋白基因克隆生物学特性
- 牛型布氏杆菌苹果酸脱氢酶单克隆抗体的制备及鉴定被引量：4
- 2012年
- 为制备牛型布氏杆菌(Brucella abortus)苹果酸脱氢酶(MDH)单克隆抗体,将牛型布氏杆菌A19菌株的MDH基因进行克隆和表达,表达产物被纯化后作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠。取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经亚克隆和间接ELISA筛选,最终获得3株分泌牛型布氏杆菌MDH蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别被命名为C2、D5和F4。ELISA检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清的抗体效价为1∶1 600～1∶3 200,小鼠腹水效价为1∶12 800～1∶25 600;Western-blot检测结果表明,3株单克隆抗体均能与牛型布氏杆菌MDH重组蛋白发生特异性反应。结果表明,本研究成功制备了牛型布氏杆菌MDH蛋白单克隆抗体,为基于MDH的布氏杆菌检测方法的建立奠定了基础。
- 童永亮韩先干孙晓庆丁铲胡青海丁家波王豪举于圣青
- 关键词：苹果酸脱氢酶单克隆抗体
- 布鲁氏菌外膜蛋白D15的表达及生物学活性分析
- 2014年
- 为研究布鲁氏菌D15蛋白的生物学特性,本实验通过PCR技术扩增牛型布鲁氏菌外膜蛋白基因D15,并克隆至表达载体pCold TF中,构建重组表达质粒pCold-D15,原核表达了约为130 ku的His标记重组蛋白His-D15。Western blot结果显示:D15能够与布鲁氏菌阳性牛血清发生特异性反应;并且具有纤连蛋白溶酶原结合活性,但不具有纤连蛋白结合活性。本研究为进一步研究D15蛋白在牛型布鲁氏菌感染、检测及亚单位疫苗的研制等方面的作用奠定基础。
- 孙晓庆韩先干宋军童永亮单雪芹丁铲胡青海于圣青
- 关键词：外膜蛋白生物学特性
- 牛型布鲁氏菌铁离子转运蛋白基因的克隆及其表达蛋白的生物学特性被引量：5
- 2012年
- 将通过PCR技术扩增的牛型布鲁氏菌铁离子转运蛋白(Brucellaferric uptake,BfuA)基因克隆至表达载体pCold TF中,构建重组表达质粒pCold TF-BfuA,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,在IPTG诱导下表达出大小约为100ku的融合蛋白His-BfuA。Western-blot分析表明,His-BfuA能与布鲁氏菌阳性牛血清发生特异性反应,表明BfuA具有免疫原性。用His-BfuA作为包被抗原,对35份布鲁氏菌阳性牛血清进行ELISA检测,结果所有被检血清均为阳性反应,表明BfuA为潜在的可用于牛型布鲁氏菌诊断的靶蛋白。此外,对BfuA的亚定位结果表明,BfuA为膜蛋白;对His-BfuA的纤连蛋白结合活性及纤连蛋白溶酶原结合活性的试验结果表明,His-BfuA不具有上述2种活性。上述结果为牛型布鲁氏菌病诊断方法的建立及亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 孙晓庆韩先干童永亮何亮丁铲胡青海丁家波于圣青
- 关键词：生物学特性
- 布鲁氏菌延胡索酸水合酶与纤连蛋白和纤连蛋白溶酶原的结合活性被引量：1
- 2013年
- 依据牛型布鲁氏菌(Brucella abortus)延胡索酸水合酶(fumarate hydratase classⅠ,Fumhy)基因序列设计1对特异性引物,以牛型布鲁氏菌A19株基因组为模板,通过PCR扩增Fumhy基因的开放阅读框,连接到pMD18-T Simple载体上后进行序列测定和分析;将Fumhy定向克隆到表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET28a-Fumhy,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下,进行Fumhy蛋白的表达,对表达的Fumhy蛋白进行免疫原性、与纤连蛋白和纤连蛋白溶酶原结合活性检测,研究Fumhy蛋白的免疫原性及相关的生物学活性。测序结果表明,Fumhy基因全长1 620bp,编码539个氨基酸;成功获得带有His标签的Fumhy重组蛋白His-Fumhy,大小为59ku,与预期结果相符合。Western-blot检测结果表明Fumhy蛋白具有免疫原性,且具有与纤连蛋白和纤连蛋白溶酶原结合活性。由此推测Fumhy蛋白可能参与布鲁氏菌在体内的感染过程。
- 宋军单雪芹韩先干刘佩红孙晓庆潘玲丁铲于圣青
- 关键词：布鲁氏菌蛋白表达纤连蛋白结合活性
