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李婷
作品数:
1
被引量:1
H指数:1
供职机构:
中南大学湘雅二医院
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
曾六旺
中南大学湘雅二医院
张洁
中南大学湘雅二医院
王翔
中南大学湘雅二医院
卢伟
中南大学湘雅二医院
胡治平
中南大学湘雅二医院
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2009
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TGFβ1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
被引量:1
2009年
目的:构建TGFβ1基因RNAi慢病毒载体。方法:根据人TGFβ1的mRNA序列选择3个靶序列并根据它们设计合成3对寡核苷酸序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列;将以上4对寡核苷酸序列退火后连入pRNA-U6/Lenti质粒,酶切和测序鉴定后,将以上质粒分别和包装质粒混合物共转染293FT细胞,包装产生病毒颗粒。各组病毒载体转染Hela细胞后,运用Real-Time PCR和ELISA检测TGFβ1mRNA和蛋白的表达水平。结果:酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pRNA-U6/Lenti质粒;各质粒与包装质粒共转染293FT细胞后能产生高滴度的慢病毒载体颗粒;各组慢病毒载体感染Hela细胞后,有两组可以显著抑制TGFβ1mRNA水平及蛋白水平的表达,其中以第一组效果最佳。结论:成功构建了人TGFβ1基因RNAi慢病毒载体。
王翔
胡治平
卢伟
唐湘祁
张洁
李婷
曾六旺
关键词:
RNAI
TGF
慢病毒载体
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