王亚
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”教育部科学技术研究重大项目国家大学生创新性实验计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 粘质沙雷氏菌马来酸顺反异构酶表达纯化及酶学性质被引量：3
- 2014年
- 从粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)中扩增得到马来酸顺反异构酶基因。将该基因连接到p ET24a载体上,并在Escherichia coli BL21(DE3)中实现了成功表达。酶学性质研究表明,重组酶的比酶活力为48.01 U/mg。其最适温度为37℃,最适p H为8.4。在最适反应条件下,Km值为4.20 mmol/L,Vmax为1.27 mmol/(L·min),kcat为4.38 s-1,催化效率kcat/Km为1.04 L/(mmol·s)。研究结果进一步显示,马来酸顺反异构酶具备良好的热稳定性(55℃半衰期为1.5 h)及高达99%以上的转化率,为马来酸顺反异构酶的进一步研究和工业应用制备高纯度的富马酸提供了理论基础和支持。
- 王亚崔文璟周丽刘中美周哲敏
- 关键词：酶学性质
- 免疫法筛选酵母HSA-IL-11融合蛋白转化子被引量：1
- 2011年
- 报道了一种筛选高表达融合蛋白HSA-IL-11的毕赤酵母转化子的免疫双膜筛选法。将生长在醋酸纤维素滤膜上的转化子进行原位诱导,再用硝酸纤维素滤膜对表达的蛋白进行原位捕捉,并经封闭过夜后使用抗HSA抗体进行免疫杂交,再用标记二抗进行显色。根据显色强弱将转化子分为强阳性、中等和阴性三类,再用抗IL-11抗体进行复筛验证。结果显示,抗HSA抗体所筛得的200株强阳性转化子中190株在抗IL-11抗体杂交验证中呈现强阳性反应,而无一株呈现阴性反应。这表明,利用免疫学方法筛选人白介素11-人血清白蛋白融合蛋白高表达菌株时,可以只使用抗HSA抗体进行一步筛选。挑选各种转化子进行摇瓶复筛和SDS-PAGE分析,结果显示,转化子融合蛋白表达量与免疫学显色反应之间呈现高度相关性,这表明利用所建立的免疫学方法筛选融合蛋白高表达转化子是可行的。
- 吴琼王亚苏婷段作营金坚李华钟
- 关键词：融合蛋白免疫学筛选
