石文军
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：科技基础性工作专项国家现代农业产业技术体系建设项目黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 不同攻毒剂量对评估H9亚型禽流感疫苗免疫效果的影响被引量：2
- 2017年
- 为了解不同攻毒剂量对评估H9亚型禽流感疫苗免疫效果的影响,本研究选取禽流感病毒(AIV)CK/Hu N/174/08和CK/Hu B/S4196/09株制备成灭活疫苗免疫21日龄SPF鸡,免疫后采血检测血凝抑制(HI)抗体,免疫后3周时分别采用这两株亲本病毒经鼻腔途径攻毒。HI抗体测定结果显示:两株疫苗免疫21 d时,平均HI抗体滴度均可达10 log2以上,表明这两株病毒均具有良好的免疫原性。测定每0.1 mL CK/Hu N/174/08株病毒EID_(50)和CID_(50)分别为10^(-9.25)和10^(-3.88),CK/Hu B/S4196/09株为10^(-8.68)和10^(-5.38)。分别以10~6 EID_(50)、10 CID_(50)及10~2 CID_(50)剂量攻毒,CK/Hu N/174/08株和CK/Hu B/S4196/09株疫苗对亲本病毒株攻击的保护率分别为100%和0、100%和80%与60%和0,表明依据EID_(50)和CID_(50)攻毒,CK/Hu N/174/08株疫苗可以得出免疫保护效果一致的结论,而CK/Hu B/S4196/09株疫苗免疫保护效果不一致。本研究表明,EID_(50)和CID_(50)均可以作为H9亚型禽流感疫苗攻毒剂量的参考依据,但以CID_(50)为依据更可靠;10 CID_(50)是最佳的攻毒剂量。本研究为科学评价H9亚型禽流感疫苗的攻毒保护效果提供了依据,对于研制疫苗时选择种毒株以及临床上选用有效疫苗均具有指导意义。
- 石文军曾显营臧金凯吴姣姣白洁陈化兰田国彬
- 关键词：免疫效果
- 禽白血病病毒对禽流感疫苗免疫效果的影响被引量：1
- 2016年
- 为研究禽白血病病毒(ALV)对禽流感(AI)疫苗免疫效果的影响,本研究将1日龄SPF鸡经腹腔接种ALV HLJ09DH02株后,于21日龄免疫重组禽流感病毒(AIV)灭活疫苗(H5N1亚型,Re-8)或禽流感-新城疫重组二联活疫苗(r LH5-8),免疫后与未感染ALV的免疫对照鸡同时检测血清HI抗体并采用H5N1亚型高致病性AIV攻毒。结果显示:实验鸡感染ALV后HI抗体滴度均显著低于相应的未感染ALV的免疫对照组(p<0.05)。感染ALV后,免疫Re-8灭活疫苗及其对照组攻毒后的排毒鸡数分别为4/10和0/10,存活率分别为90%和100%;感染ALV后,免疫r LH5-8活疫苗及其对照组攻毒后的排毒鸡数分别为10/10和0/10,存活率分别为0和100%;未感染ALV的AI免疫鸡均不发病、不死亡、不排毒;空白对照鸡攻毒后3 d内全部死亡并且排毒。本研究表明,ALV对AI灭活疫苗和活疫苗均具有显著免疫抑制作用,建议加强种鸡ALV的净化,降低对AI等疫苗免疫效果的影响。
- 李鑫曾显营高玉龙白洁石文军陈化兰田国彬
- 关键词：禽白血病禽流感疫苗免疫效果
- DBNL蛋白影响A型流感病毒复制机制的研究
- 2023年
- A型流感病毒(IAV)在宿主细胞内复制过程中需要许多宿主因子的参与,同时IAV也能调控多种宿主因子的表达。为寻找调控IAV复制的宿主因子,本研究通过SDS-PAGE电泳检测发现H1N1亚型流感病毒A/WSN/1933株(简写为WSN)感染A549细胞会上调表达55 ku左右的特异蛋白条带(感染后9 h),将该55 ku左右的蛋白条带切胶回收后进行质谱分析,根据质谱分析的筛选标准选择蛋白得分(Mass score)较高、谱图数(Matches)和序列数(Sequences)较为可信的宿主因子DBNL作为调控IAV复制的潜在研究对象进一步研究。本研究针对DBNL设计特异的siRNA和对照Scrambled siRNA,将其分别转染A549细胞,通过荧光定量PCR确定DBNL siRNA在转录水平的干扰效果显著;利用细胞活力测定试验确定DBNL siRNA的干扰不影响细胞活力。利用DBNL siRNA下调表达A549细胞中的DBNL后,以WSN感染该细胞,在感染后24 h、48 h分别收集细胞上清,利用MDCK细胞进行噬斑滴定试验。试验结果显示,与对照组相比,下调表达DBNL后IAV的滴度极显著降低(P<0.01),表明下调表达DBNL能够抑制A549细胞中的IAV复制。利用siRNA下调表达A549细胞中的DBNL后,以WSN感染A549细胞,采用激光共聚焦试验鉴定IAV NP蛋白的表达与定位情况。结果显示,在病毒感染后6 h,对照组中红色荧光集中分布在细胞质中,而DBNL siRNA组中红色荧光在细胞核与细胞质中均有分布,表明下调表达DBNL能够抑制细胞中IAV NP蛋白的出核。反之,通过转染过表达DBNL的重组质粒,以WSN感染A549细胞,采用激光共聚焦试验鉴定IAV NP蛋白的表达与定位情况。结果显示,在病毒感染后4 h,转染pCAGGS的对照组中红色荧光主要分布在细胞核中,而过表达DBNL组中的红色荧光在细胞核与细胞质中均有分布,表明过表达DBNL能够促进细胞中IAV NP蛋白的出核。以上研究结果证实DBNL正调控IAV的复制与其NP蛋白的出核。本研究丰富了DBNL功能的多样
- 孟德锦李奇兵胡玉珍王一涵王波石文军单智博姜丽陈化兰李呈军
- 关键词：流感病毒NP蛋白
- TRIM74对流感病毒复制机制影响的研究被引量：1
- 2022年
- 为探究三方基序蛋白74(TRIM74)对流感病毒复制的影响,本研究设计并合成靶向TRIM74基因的siRNA,即siTRIM74-331,将其转染A549细胞后,利用荧光定量PCR检测siTRIM74-331对细胞中TRIM74转录水平的干扰效率,利用细胞活力检测试剂盒检测该siRNA对细胞活力的影响。结果表明siTRIM74-331的干扰效率较好且不影响细胞活力。将siTRIM74-331转染A549细胞后感染禽流感病毒(AIV)A/WSN/1933株(WSN),并于感染后24 h、48 h分别进行噬斑滴定,结果显示干扰TRIM74的表达可抑制流感病毒的复制。利用慢病毒包装系统构建TRIM74过表达细胞系(A549-pLVX-TRIM74)和对照细胞系(A549-pLVX),并经qPCR及western blot鉴定正确后,将WSN株(MOI 0.01)分别感染上述两种细胞,并于感染后24 h、48 h收集细胞上清分别进行噬斑滴定。结果表明,过表达TRIM74能够显著促进流感病毒的复制。将WSN株(MOI 5)分别感染A549细胞和HEK293T细胞后,分别采用qPCR和western blot检测细胞中内源TRIM74的转录及蛋白表达水平,结果表明WSN能够刺激细胞内源TRIM74的转录与表达,推测宿主细胞可能通过增强TRIM74的表达响应流感病毒的感染。为探究TRIM74在宿主细胞天然免疫反应中发挥的作用,将不同剂量的表达质粒pTRIM74-V5转染HEK293T细胞,经western blot确定其能够在细胞中呈剂量依赖性表达后,将上述剂量的p TRIM74-V5与p RL-TK、pIFN-β-Luc报告质粒共转染HEK293T细胞(1组);同时将上述剂量的pTRIM74-V5与p RL-TK、pISRE-Luc报告质粒共转染HEK293T(2组),24 h后感染仙台病毒(SeV),12 h后采用双荧光素酶试验检测过表达TRIM74对IFN-β和ISRE启动子活性的影响。结果显示,转染空载体的对照细胞在感染SeV后上述两种启动子的活性均升高,而1组和2组细胞中该两种启动子的活性均极显著下降,且随pTRIM74-V5转染量的升高二者的活性均呈下降趋势。分别将SeV和poly(I:C)刺激TRIM74过表达及干扰其表达的HEK293T细胞,12
- 叶苗苗孙楠李奇兵石文军王波王广文姜丽陈化兰李呈军
- 关键词：流感病毒干扰素
