邓丹丹
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 苦荞10kD过敏原的重组表达及部分性质分析被引量：2
- 2014年
- 以苦荞种子灌浆期cDNA文库中获得的苦荞10 kD过敏原基因序列TBAP10(tartary buckwheat 10 kD allergen protein,TBAP10;GenBank登录号JK729379.1)为基础,构建重组表达载体pET47b-TBAP10,重组蛋白在大肠杆菌BL21 Star(DE3)中以包涵体形式表达。经包涵体复性和钴离子螯合层析纯化目的蛋白,并对其过敏活性、热稳定性及在模拟胃肠环境中的稳定性进行了分析。Western blotting显示该蛋白与苦荞16 kD过敏蛋白Fag t2存在免疫交叉反应。竞争性ELISA证明重组蛋白TBAP10具有与荞麦过敏患者血清IgE特异的结合活性;TBAP10具有强的热稳定性,能耐受15 min的沸水浴;模拟胃肠环境的消化结果显示TBAP10对胃蛋白酶具有强的耐受性,但对胰蛋白酶无耐受性。
- 陈鹏封雪王磊邓丹丹李学俊
- 关键词：原核表达
- 苦荞黄酮-3-羟化酶截短体的原核表达与多克隆抗体制备被引量：5
- 2013年
- 为了制备苦荞黄酮-3-羟化酶的多克隆抗体,该研究以苦荞种子灌浆期cDNA文库中获得的苦荞黄酮-3-羟化酶基因截短体(truncated Flavanone-3-hydroxylase,TrF3 H)序列为基础,采用PCR扩增F3 H的截短序列编码区(TrF3 H),构建了原核表达载体pET47b-TrF3 H,并转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS中进行诱导表达,将经钴离子螯合层析柱纯化后的目的蛋白切胶回收后制备了高效价的多克隆抗体。结果表明:pET47b-TrF3 H在大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS中以包涵体的形式高效表达。蛋白质印迹显示,制备的多克隆抗体能特异识别其对应的抗原,天然的黄酮-3-羟化酶蛋白在苦荞的未成熟种子中大量表达。原核表达体系的建立和多克隆抗体的制备为进一步探讨F3H在苦荞中功能奠定了基础。
- 李玉萍邓丹丹张海纳李学俊陈鹏
- 关键词：苦荞原核表达多克隆抗体
