魏建文
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 供职机构：福建省东山赤山国有防护林场更多>>
- 发文基金：福建省科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 大头典竹ISSR反应体系建立与优化被引量：2
- 2017年
- 以大头典竹叶片为材料,采用单因素分析法和正交设计直观分析法,对影响PCR扩增效果的Mg^(2+)、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA含量这5个PCR反应体系主要成分以及退火温度和循环次数进行筛选。通过研究建立了适合大头典竹的ISSR-PCR反应体系:20μL反应液中含2.5 mmol/L Mg^(2+),0.25 mmol/L dNTPs,1.25 U TaqDNA聚合酶,0.6μmol/L引物,10 ng模板DNA,2μL 10×Buffer,10.55μL ddH_2O。相应反应程序为94℃预变性5 min;94℃变性45 s,54.5℃退火30 s,72℃延伸90 s,35个循环;72℃延伸10 min,4℃保存。应用建立的优化反应体系成功地筛选出16条多态性较高的引物,表明该体系具有较高稳定性、重现性、适用性,可较好地应用于大头典竹不同地理种源间的遗传多样性研究。
- 瞿印权徐雯沈露何天友魏建文荣俊冬郑郁善
- 关键词：大头典竹ISSR
- 花吊丝竹ISSR-PCR反应体系的正交优化被引量：2
- 2017年
- 本研究利用L16(45)正交试验设计,对影响ISSR-PCR反应体系的5个影响因素(Mg^(2+)浓度,d NTPs浓度,Taq DNA聚合酶浓度,引物浓度及模板DNA含量)进行优化。并在50~60℃范围内摸索引物UBC845的最适退火温度,并建立了花吊丝竹的最佳ISSR-PCR反应体系:2.5 mmol/L Mg^(2+),0.25 mmol/L d NTPs,1.50 U Taq DNA聚合酶,0.5μmol/L引物,80 ng模板DNA,2μL 10x Buffer,9.5μL dd H2O,ISSR-PCR扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性45 s;52.7℃退火30 s,72℃延伸90 s,35个循环;72℃延伸10 min,4℃保存。利用优化的反应体系从100条引物中筛选出16条多态性较好的引物,该体系的建立有助于花吊丝竹种质资源遗传多样性分析和指纹图谱的构建。
- 瞿印权徐雯沈露陈剑成何天友魏建文荣俊冬郑郁善
- 关键词：花吊丝竹ISSR正交设计
