刘艳艳
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 供职机构：潍坊医学院基础医学院山东省高校免疫学重点实验室更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目山东省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 白细胞介素-1在肿瘤靶向治疗策略中的价值
- 2009年
- 白细胞介素-1(IL-1)家族成员是一类重要的促炎性细胞因子,近年研究证实,该家族的因子不仅是体内免疫调节和炎症反应的核心介质,而且在许多肿瘤形成和进展中起着重要作用,以IL-1为靶向针对其合成及信号转导途径各层次的治疗策略,如ICE抑制剂、NF-κB抑制剂、IL-1Ra等均显示了在肿瘤治疗中的价值。
- 刘艳艳梁淑娟
- 关键词：白细胞介素1肿瘤靶向治疗
- siRNA阻断NF-κB通路抑制HepG2细胞增殖及NK杀伤抵抗性
- 2009年
- 目的利用小干扰RNA(siRNA)阻断肝癌细胞HepG2中的NF-κB信号通路,研究其对肝癌细胞增殖活性及NK杀伤敏感性的影响。方法利用NF-κB p65 siRNA转染HepG2细胞,48h后分别进行Western blotting及ELISA检测NF-κB p65蛋白的表达;MTT法检测转染后细胞的增殖变化及对NK-92细胞杀伤敏感性的变化。结果转染NF-κB p65 siRNA后肝癌细胞中NF-κB p65蛋白表达的水平明显下降;MTT检测发现,与对照组相比,NF-κB p65 siRNA能够明显抑制HepG2细胞的增殖活性,同时使其对NK-92细胞介导的杀伤敏感性增加(P<0.05)。结论siRNA阻断NF-κB通路能够抑制肝癌细胞增殖及对NK细胞杀伤的抵抗性。
- 刘艳艳孙萍梁淑娟
- 关键词：SIRNANF-ΚB增殖
- pLIVE-IL-1β表达载体的构建及在Hepa1-6细胞的表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建应用于体内表达和研究的小鼠IL-1β肝癌细胞特异性表达载体,观察其在小鼠HE-PA1-6细胞中的表达水平。方法分离BALB/c小鼠外周血淋巴细胞,LPS刺激后提到总RNA,RT-PCR扩增IL-1β基因,与pLIVETM连接构建pLIVE-IL-1β重组表达载体,并通过菌落PCR、限制性酶谱分析、DNA序列分析进行鉴定。利用TransITTM将pLIVE-IL-1β转染至Hepa1-6肝癌细胞,RT-PCR分析IL-1β的表达水平。结果从小鼠腹腔巨噬细胞中RT-PCR扩增得到一822bp的片段,纯化的PCR产物与pLIVETM同时经XhoⅠ和NheⅠ双酶切后连接,菌落PCR鉴定获得多个阳性克隆,经质粒XhoⅠ+NheⅠ限制性酶谱分析,酶解出822bp的条带,DNA序列分析证实重组载体中的DNA序列与GeneBank登录的小鼠IL-1β基因一致。将该载体转染Hepa1-6细胞,RT-PCR证实,与转染pLIVETM的对照细胞相比,IL-1β的表达水平明显升高。结论成功构建了小鼠IL-1β肝癌组织特异性表达载体pLIVE-IL-1β,该载体能够在小鼠肝癌细胞中稳定高效表达IL-1β。
- 王焕芹梁淑娟刘艳艳李青春肖伟玲李若葆
- 关键词：肝癌IL-1Β促炎性细胞因子
- 肝癌组织特异性P_(afp)IRES2-EGFP表达载体的构建及表达
- 2008年
- 目的构建AFP最小启动子调控的小鼠肝癌组织特异性表达载体,观察其在小鼠H22肝癌细胞中的特异性表达。方法从H22细胞总DNA和荧光载体pIRES2-EGFP中分别PCR扩增AFP最小启动子区序列和CMV增强子(ECMV),利用重叠延伸PCR方法(SOE)获得AFP启动子驱动的嵌合调控序列,将其克隆入pIRES2-EGFP载体,进行菌落PCR、限制性酶谱分析、DNA序列测定。通过jetPEI方法转染H22肝癌细胞和YAC1淋巴瘤细胞,荧光显微镜下观察其表达的组织特异性。结果从小鼠H22细胞DNA和pIRES2-EGFP中分别扩增得到229bp和324bp的片段,纯化后的PCR产物通过SOE扩增得到一537bp的条带,均与预期序列长度一致。SOE产物与pIRES2-EGFP连接,菌落PCR鉴定获得数个阳性克隆,质粒经Nde I+NheⅠ限制性酶谱分析酶解出537bp条带,DNA序列分析证实重组载体中的嵌合DNA与GeneBank中小鼠AFP启动子和ECMV序列完全一致。结论本研究成功构建了AFP启动子调控的小鼠肝癌组织特异性表达载体PafpIRES2-EGFP,该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性表达外源基因。
- 牟东珍梁淑娟刘艳艳王雪净吴慧娜李若葆
- 关键词：肝癌组织特异性表达AFP启动子
- 肝癌细胞特异性IL-1β反义RNA对小鼠移植肝癌的抑制被引量：6
- 2009年
- 目的:构建肝癌细胞特异性小鼠IL-1β反义RNA表达载体,观察其对H22肝癌细胞小鼠移植瘤生长的影响及其相关机制。方法:构建由AFP最小启动子和CMV增强子嵌合序列调控的携IL-1β反义RNA表达载体pafpIRES2-antiIL-1β1和pafpIRES2-antiIL-1β2,经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定进行鉴定。反义RNA表达载体转染小鼠H22肝癌细胞,分H22/mock组、H22/antiIL-1β1组、H22/antiIL-1β2三组,RT-PCR检测IL-1β的表达水平。以转染后的H22细胞皮下接种建立荷肝癌小鼠模型,观察移植瘤体积和重量,MTT法检测荷瘤小鼠脾脏中分离的NK细胞对H22细胞的杀伤活性。结果:经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定证实成功构建能够在肝癌细胞中特异性表达IL-1β反义RNA的表达载体pafpIRES2-anti-IL-1β1和pafpIRES2-antiIL-1β2,转染H22细胞后细胞中IL-1β表达水平明显下降,以pafpIRES2-antiIL-1β2更为显著。成功建立荷肝癌小鼠模型,与H22/mock组小鼠相比,H22/antiIL-1β2组小鼠移植瘤体积较小,生长显著减慢(P<0.05)。H22/anti-IL-1β1、H22/antiIL-1β2组荷瘤小鼠的NK细胞对H22细胞的杀伤活性明显增强(P<0.05或P<0.01)。结论:成功构建的肝癌细胞特异性IL-1β反义RNA表达载体可有效抑制小鼠移植肝癌的生长,其机制与靶向阻断IL-1β表达、上调NK细胞的杀伤活性有关。
- 刘艳艳梁淑娟王焕芹张素华肖伟玲吴慧娜
- 关键词：肝癌白细胞介素1Β反义RNANK细胞
- IL-1β反义RNA表达载体的构建及对肝癌细胞中IL-1β水平的影响
- 2008年
- 目的构建小鼠IL-1β反义RNA表达载体,观察对肝癌细胞中IL-1β表达的阻断效果。方法提取细胞总RNA,RT-PCR扩增IL-1β1和IL-1β2,将其反向连接到肝癌组织特异性表达载体PafpIRES2-EGFP,构建PafpIRES2-antiIL-1β1和PafpIRES2-antiIL-1β2反义RNA表达载体,利用jetPEI转染H22肝癌细胞和YAC-1淋巴细胞,荧光显微镜下观察反义RNA载体的表达,RT-PCR方法分析H22细胞中IL-1β表达水平的变化。结果RT-PCR扩增到两条长度分别为264和284bp的片段,与IL-1β1和IL-1β2相符,将其反向与PafpIRES2-EGFP连接,经菌落PCR和DNA序列分析证实,获得了PafpIRES2-antiIL-1β1和PafpIRES2-antiIL-1β2反义RNA表达载体。上述载体转染H22细胞后,荧光显微镜下可见细胞表达出明亮绿色荧光,而YAC-1细胞则未见荧光。RT-PCR分析证实转染反义RNA后H22细胞中IL-1β表达水平明显下降,尤以IL-1β2反义RNA的阻断效果更为显著。结论成功构建了小鼠IL-1β肝癌细胞特异性反义RNA表达载体PafpIRES2-antiIL-1β1,PafpIRES2-antiIL-1β2,两载体能有效地阻断肝癌细胞中IL-1β的表达。
- 梁淑娟吴慧娜肖伟玲牟东珍刘艳艳
- 关键词：IL-1Β反义RNA肝癌
- AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组载体的构建及其在肝癌H22细胞中的表达被引量：3
- 2009年
- 目的:构建小鼠甲胎蛋白(AFP)启动子调控的小鼠IL-1β(mIL-1β)重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β,并检测其在真核细胞内的表达。方法:重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)获得含小鼠AFP最小启动子及巨细胞病毒(CMV)增强子区(ECMV)的嵌合基因,将其克隆至pIRES2-EGFP载体,构建肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP。RT-PCR扩增小鼠IL-1β基因,克隆至pafpIRES2-EGFP,进行酶谱分析及DNA序列测定。利用jetPEI法将其分别转染H22细胞和YAC-1细胞,倒置相差荧光显微镜下观察,RT-PCR分析mIL-1β表达水平的变化。结果:SOE-PCR方法获得长度为537bp的AFP和ECMV嵌合基因,克隆后经限制性酶切和DNA序列分析确认成功构建了小鼠肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP。PCR扩增小鼠IL-1β基因后将其克隆至pafpIRES2-EGFP,获得AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β,细胞转染分析证实,该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性高效表达,RT-PCR检测可见转染细胞中mIL-1β水平明显升高。结论:成功构建真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β,该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性表达IL-1β。
- 李青春梁淑娟王雪净刘艳艳王焕芹张素华
- 关键词：IL-1ΒAFP启动子组织特异性肝癌
