吴萌
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江苏省高校优势学科建设工程资助项目江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 番鸭细小病毒VP3基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2014年
- 为获得针对番鸭细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体,根据已发表的该病毒基因序列设计一对引物,利用PCR扩增出VP3基因,将其克隆到原核表达载体p ET-32a,转化感受态细胞BL21(DE3)。经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测重组蛋白。将重组蛋白切胶免疫BALB/c小鼠,制备抗番鸭细小病毒部分结构蛋白的多克隆抗体。结果显示成功获得VP3基因,构建的原核表达重组质粒成功表达预期的重组蛋白,免疫小鼠获得的多克隆抗体能与番鸭细小病毒及VP3蛋白反应。表明制备的多克隆抗体可用于MDPV的检测,并为进一步研究MDPV奠定了基础。
- 吴萌成大荣朱善元吴海涛左伟勇王安平
- 关键词：番鸭细小病毒VP3基因原核表达多克隆抗体
- 猪戊型肝炎病毒ORF2基因不同抗原区域的原核表达及鉴定被引量：2
- 2014年
- 为了表达出含有猪戊型肝炎病毒（hepatitis Evirus，HEv）天然免疫表位的重组蛋白作为血清学诊断的候选抗原，利用Protean软件对猪戊型肝炎病毒ORF2区域基因进行分析，选取2段抗原富集区域（290～405aa和398～619aa）用RT—PCR技术扩增该区域基因。然后把扩增的目的基因导入pGEX-6P-1表达载体中并在大肠杆菌BL21中诱导表达。结果显示，成功表达了大小为39ku和48ku的融合蛋白；重组蛋白经变复性透析纯化后进行的Western—blot分析表明，48ku融合蛋白可与HEV阳性血清反应，表明该蛋白具有良好的反应原性。结果表明，猪HEV的天然免疫表位处于398～619aa之间。研究结果为HEV结构蛋白抗原表位的筛选及猪戊型肝炎血清学诊断的研究奠定了基础。
- 郭志陈飞刘水芳吴萌徐建生
- 关键词：猪戊型肝炎病毒ORF2基因原核表达融合蛋白
- 鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白的原核表达及鉴定被引量：1
- 2015年
- [目的]用大肠杆菌表达出CIAV的衣壳蛋白(VP1)作为免疫抗原,以建立鸡传染性贫血病毒(CIAV)的血清学诊断方法。[方法]根据已发表的CIAV的衣壳蛋白(VP1)序列,结合Protean软件预测出抗原富集区域,设计并合成1对引物,利用PCR扩增该区域基因,将扩增成功的VP1基因片段经T4连接酶连接至PGEX-6P-1表达载体。连接成功的重组质粒转化不同的大肠杆菌表达菌株,通过IPTG诱导进行原核表达,筛选出表达量最高的菌株及最佳诱导时间和IPTG诱导浓度。以感染CIAV的鸡阳性血清为一抗,对重组蛋白GST-VP1进行Western-blot分析。[结果]成功获得了重组质粒PGEX-VP1,诱导表达后经SDS-PAGE和Western-blot分析,分子量约71k D的融合蛋白GST-VP1在大肠杆菌Rosseta中以包涵体形式大量表达,并能与鸡传染性贫血病毒阳性血清发生反应。[结论]该研究可为抗CIAV单克隆抗体的制备及血清学诊断方法的建立等研究奠定基础。
- 余树培夏文龙胡成吴海涛吴萌赵方成大荣
- 关键词：鸡传染性贫血病毒VP1蛋白原核表达
