岳山
- 作品数：20 被引量：75H指数：6
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划黑龙江省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 黑龙江省大庆地区鹅源大肠杆菌的分离鉴定及毒力基因检测被引量：2
- 2023年
- 为了研究黑龙江省大庆地区鹅源大肠杆菌流行株的毒力基因分布情况。从大庆周边6个地区鹅养殖场发病鹅体内分离大肠杆菌,采用PCR方法及K-B纸片法进行了毒力基因检测和药敏试验。结果表明:53株大肠杆菌分离鉴定出48株大肠杆菌含有毒力基因,以气杆菌素iuc D(48/53,91%)、强毒力岛Fyu A(27/53,51.3%)、黏附素I型菌毛Fim H(38/53,71.1%)、大肠杆菌外膜蛋白omp A(47/53,89%)为主要毒力基因;抗生素敏感率最高为庆大霉素和呋喃妥因;耐药率最高为四环素、复方新诺明和环丙沙星。本研究为黑龙江地区鹅大肠杆菌病的预防和控制提供了数据资料。
- 高丽付金蕾黄雯静吴陈华刘思雨赵童岳山陈楠楠徐维维刘宇张泽财周玉龙周玉龙
- 关键词：致病性大肠杆菌毒力基因耐药性
- 牛源A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及毒力基因检测被引量：10
- 2019年
- 为确定黑龙江省2个规模化奶牛场犊牛急性呼吸道感染的病因,笔者进行了病原的分离纯化,细菌16S rDNA基因和多杀性巴氏杆菌特异性基因OmpH鉴定、生化试验、药敏试验、半数致死量试验、荚膜血清型分型及22种毒力因子的检测,以确定主要病原的种类、型别及生物学特性。结果表明,从死亡牛肺和患病牛鼻拭子分离的2株病原菌均为荚膜A型多杀性巴氏杆菌,分别被命名为WC16551和LY01,序列分析结果表明,其与牛源多杀性巴氏杆菌同源性达到99%以上。药敏试验显示2株菌均对恩诺沙星、环丙沙星高度敏感。半数致死量结果表明,LY01菌株的毒力明显强于WC16551菌株,2株分离菌均携带19种毒力因子,未检出hgbB、toxA和nanB三种基因。上述研究结果表明,导致2个牛场发病的主要病原菌为荚膜A型多杀性巴氏杆菌。
- 何泊宁周金玲赫鸣睿刘增禄刘增禄王丽吴陈华黄雯静刘宇岳山刘宇
- 关键词：毒力因子
- 牛病毒性腹泻病毒N^(pro)基因克隆、生物信息学分析及其表达鉴定
- 2021年
- 目的研究牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea viruses,BVDV)N-端自身蛋白酶(N^(pro))的生物信息学特征及表达特性。方法克隆NADL株BVDV N^(pro)基因,利用生物信息学软件分析其编码蛋白的理化性质、疏水性、跨膜区、信号肽、二级及三级结构,并进行原核表达、纯化及鉴定。将纯化的重组N^(pro)蛋白免疫昆明小鼠,制备鼠抗N^(pro)蛋白多克隆抗体,采用ELISA法、间接免疫荧光试验及Western blot法进行多克隆抗体效价、特异性及蛋白反应原性检测。结果 PCR扩增的N^(pro)基因全长504 bp,编码168个氨基酸,N^(pro)基因与BVDV V026株属于同一分支。N^(pro)蛋白属于外膜蛋白,有亲水性,无信号肽,二级结构以β折叠和无规则卷曲为主。重组表达质粒pET-28a-N^(pro)经PCR及酶切鉴定正确,测序结果与原序列一致;表达的重组N^(pro)蛋白相对分子质量约25 000,纯化后纯度达95%以上,且免疫原性良好;制备的鼠抗N^(pro)蛋白多克隆抗体效价为1∶128 000,特异性良好。结论成功在大肠埃希菌中表达了BVDV N^(pro)蛋白,表达的N^(pro)蛋白免疫原性良好,为进一步研究BVDV N^(pro)蛋白的功能奠定了基础。
- 王丽马骏吴陈华黄雯静高丽付金蕾赵童刘思雨岳山刘宇刘宇朱战波
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒原核表达生物信息学分析
- 阳离子表面活性剂与戊二醛复合消毒剂毒性评价被引量：3
- 2018年
- 目的了解一种阳离子表面活性剂与戊二醛复合消毒剂的安全性,评价其毒性。方法采用急性经口毒性试验、皮肤刺激试验、急性眼刺激试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验等评估复合消毒剂的安全性。结果该复合消毒剂原液急性经口毒性试验LD50>5 000 mg/kg;对完整皮肤和眼无刺激性;各剂量组小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率和精子畸形率与阴性对照相比无显著性差异,与阳性对照差异显著。结论该复合消毒剂无毒性,安全性良好。
- 刘珊珊陈楠楠王天何泊宁刘增禄张世勋周金玲岳山刘通赵尚琪赫鸣睿王丽刘宇朱战波
- 关键词：阳离子表面活性剂戊二醛毒性评价
- 黑龙江省部分地区进口荷斯坦奶牛病毒性腹泻血清流行病学调查被引量：4
- 2018年
- 为了解黑龙江省进口荷斯坦奶牛感染牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的情况,试验采用原核表达蛋白E0-E2为抗原,建立间接ELISA法,检测奶牛血清中BVDV的抗体。结果表明:九三地区的BVDV抗体阳性率最高,达到了72.22%;密山地区阳性率最低,但也达到了59.91%;北安地区阳性率为61.84%,总体血清阳性率为64.35%。说明病毒性腹泻在黑龙江省存在非常高的血清阳性率,提示必须加强对本病的检疫净化,采用间接ELISA法对不同牛群进行BVDV抗体检测,可以及时了解病毒性腹泻的感染清况,为防治该病提供理论依据。
- 赵静虎刘宇王华欣刘通周金玲岳山何泊宁刘珊珊张世勋王天刘增禄朱战波
- 关键词：荷斯坦奶牛牛病毒性腹泻病毒血清阳性率
- 牛METTL3真核表达载体的构建及生物信息学分析
- 2021年
- [目的]对牛甲基转移酶METTL3基因进行真核表达并对其蛋白进行生物信息学分析。[方法]以MDBK细胞为模板,RT-PCR扩增牛METTL3基因片段,构建pcDNA3.0-METTL3载体并转染至293T细胞后,进行Western Blotting验证,通过生物信息学在线工具分析METTL3蛋白。[结果]PCR、双酶切鉴定、Western Blotting和生物信息学分析表明牛METTL3基因编码区序列全长为1760 bp,编码了580个氨基酸,蛋白的分子质量64.4469 kDa,PI为5.98,属于不稳定亲水性蛋白,不存在跨膜结构与信号肽。二级结构主要是由α螺旋和无规则卷曲构成,三级结构与二级结构预测结果一致。[结论]成功构建了pcDNA3.0-HA-METTL3真核表达载体,生物信息学分析表明,牛METTL3蛋白为在细胞质中分泌合成的可溶蛋白,α螺旋和无规则卷曲为二级结构中最主要的结构元件。
- 黄雯静赵尚琪吴陈华高丽付金蕾刘思雨赵童陈楠楠岳山张泽财刘宇周玉龙朱战波
- 关键词：真核表达载体生物信息学
- 牛产气荚膜梭菌分离株毒素基因的检测与分析被引量：4
- 2019年
- 为了解黑龙江省牛源产气荚膜梭菌分离株的基因型,检测β2和CPE两种次要毒素因子在牛源产气荚膜梭菌分离株中的携带情况。通过PCR方法检测了产气荚膜梭菌13个野毒株的cpa、cpb、etx、itx四种分型毒素、cpb2、cpb2的两个等位基因突变体(atypical cpb2和consensus cpb2)及肠毒素(cpe)基因。结果表明:92.3%(12/13)的产气荚膜梭菌分离株为A型,检测到1株D型;A型菌中β2毒素基因检出率为66.7%(8/12);β2毒素基因阳性菌株中75%(6/8)携带非典型cpb2基因,50%(4/8)携带典型cpb2基因,非典型突变体占优势。动物致病性试验发现β2毒素阳性菌株(8株)与β2毒素基因阴性菌株(4株)各有2株分离株具有致病性。所有菌株CPE毒素基因PCR检测均为阴性。研究为产气荚膜梭菌病的发病机理和疫苗开发提供了理论依据。
- 刘增禄赫鸣睿周金玲何泊宁王天赵尚琪王丽张世勋刘珊珊岳山刘通刘宇朱战波
- 关键词：产气荚膜梭菌
- 牛外周血淋巴细胞PD-1胞外区基因的原核表达及多抗制备被引量：1
- 2021年
- 目的原核表达牛外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes,PBL)表面程序性细胞死亡蛋白-1(programmed cell death protein 1,PD-1),并制备其多抗血清。方法以PBL的cDNA为模板扩增牛PD-1胞外区片段,与载体pET-28a(+)连接,构建重组质粒pET-28a-PD-1,并进行生物信息学分析;重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),经不同浓度的IPTG诱导表达牛PD-1胞外区重组蛋白(简称牛PD-1蛋白),产物进行SDS-PAGE及Western-blot分析;纯化的目的蛋白免疫小鼠制备血清多抗,与CP、NCP型牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)体外孵育牛PBL 72 h,检测BVDV病毒拷贝数。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-28a-PD-1构建正确;牛PD-1胞外区基因读码框编码147个氨基酸,相对分子质量约为16040,其二级结构主要由α螺旋、延伸链、无规则卷曲构成,与人及鼠序列的同源性分别为79%和71%;在37℃,0.8 mmol/L IPTG诱导条件下,牛PD-1蛋白相对分子质量约19000,以包涵体的形式表达;制备的多抗血清效价最高为1∶102400,能与目的蛋白发生特异性反应,显著降低CP、NCP型BVDV病毒拷贝数(P<0.05)。结论成功构建了重组表达质粒pET-28a-PD-1,获得了牛PD-1蛋白及其多抗血清,且免疫原性较好,PD-1阻断抑制BVDV在PBL细胞中的复制,为开发具有调节及治疗慢性病毒感染的生物制品奠定基础。
- 刘珊珊吴陈华刘宇刘宇赫鸣睿王丽王天何泊宁王天岳山黄雯静张世勋
- 关键词：原核表达
- IBRV TaqMan-MGB实时荧光定量PCR方法在BVDV和IBRV共感染中病毒定量检测的应用被引量：4
- 2018年
- 目的应用牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)Taq Man-MGB实时荧光定量PCR方法进行牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)和IBRV共感染的病毒定量检测,进一步研究BVDV和IBRV共感染后BVDV对IBRV复制的影响。方法分别用0.2和1.0 MOI的BVDV感染MDBK细胞,待细胞出现50%CPE时,再用0.1 MOI的IBRV共感染,作用24 h后收集样品,采用Taqman-MGB实时荧光定量PCR方法检测IBRV的拷贝数,并与对照组(IBRV单独感染组)进行比较。结果在先感染0.2和1.0 MOI BVDV情况下,IBRV拷贝数分别为3.0×10~6和6.47×10~6拷贝/μL,单独感染IBRV的对照组的拷贝数为1.15×10~7拷贝/μL。结论在体外情况下,BVDV对IBRV的复制影响较小,为研究BVDV和IBRV的共感染机制以及制备BVDV和IBRV感染同一细胞的二联苗奠定了基础。
- 王华欣刘宇赵静虎刘通周金玲岳山何泊宁刘珊珊张世勋王天刘增禄朱战波
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒牛传染性鼻气管炎病毒病毒载量
- 鹅盲肠乳酸菌的筛选及抑菌能力分析
- 2021年
- 为了筛选出具有良好抑菌活性及耐酸、耐胆盐特性的鹅源乳酸菌,试验采用传统的细菌培养方法从健康狮白鹅盲肠中分离细菌,并结合革兰氏染色、生化鉴定和16S rRNA测序方法筛选乳酸菌并对分离菌的耐酸、耐胆盐、耐消化酶能力进行测定,对有高度耐受性的乳酸菌进行抑菌能力、生长特性、产酸能力及生物安全性研究。结果表明:从鹅盲肠内共分离出44株乳酸菌,包括唾液乳酸杆菌19株、罗伊氏乳杆菌和鼠李糖乳杆菌各7株、英格兰乳杆菌和短乳杆菌各4株、约翰乳杆菌3株;从44株乳酸菌中筛选出4株产酸能力较好的乳酸菌,包括2株唾液乳酸杆菌(分别命名为S5、S6)、1株鼠李糖乳杆菌(命名为S8)和1株罗伊氏乳杆菌(命名为S12),这4株乳酸菌能够耐受pH值2~3、胆盐浓度0.2%~0.6%及胰蛋白酶浓度0.8%~1.2%的环境;S5、S6、S8和S12对致病性金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌及鸭疫里默氏杆菌均有一定抑制作用,同时具有良好的生长特性、产酸能力及生物安全性,无毒副作用。说明筛选出的S5、S6、S8和S12这4株乳酸菌具有良好的益生菌特性,可用于后续开发鹅用微生态制剂。
- 付金蕾高丽黄雯静吴陈华刘思雨赵童岳山陈楠楠刘宇朱战波
- 关键词：盲肠乳酸菌产酸能力抑菌能力
