张敏
- 作品数：9 被引量：18H指数：3
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划江苏高校优势学科建设工程项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 盐酸氯苯胍原料药主成分含量及有关物质的测定
- 2019年
- 为建立测定盐酸氯苯胍原料药中主成分含量及有关物质的超高效液相色谱法,采用ACQUITY UPLC BEH C18柱(1.7μm,2.1mm×100mm),以乙腈-2mL/L磷酸水(V∶V=40∶60)为流动相,检测波长为313nm,进样量10μL。在优化的色谱条件下,主成分与各杂质峰分离度良好,盐酸氯苯胍在15μg/mL～35μg/mL范围内线性关系良好(R2=0.999),低、中、高浓度样品的平均回收率分别为100.85%、100.61%、100.40%,相对标准偏差(RSD)分别为1.50%、0.07%、0.64%。盐酸氯苯胍的主要杂质为保留时间1.612的R1和5.416的R2,以主成分自身对照法计算,暂定单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.16倍(0.16%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的0.26倍(0.26%)。该方法分离时间短,检出限低,分离度好,结果准确、可靠,可作为盐酸氯苯胍及其有关物质的检测方法。
- 佘如凤张敏夏溯寒张丽芳王霄暘费陈忠张洁薛飞群
- 关键词：盐酸氯苯胍超高效液相色谱法
- 流产布氏杆菌rfbD基因缺失株的构建及其生物学特性被引量：2
- 2013年
- 为了研究流产布氏杆菌rfbD基因缺失株的生物学特性和毒性变化,采用同源重组的方法构建该缺失株。以pDS132质粒为模板扩增sacB片段,通过NdeⅠ酶切位点,用T4连接酶将sacB片段与pUC19质粒连接,获得自杀质粒SacB-pUC19;用重组PCR方法扩增rfbD ORF内缺失668bp的缺失突变核,通过PstⅠ、SmaⅠ酶切位点,用T4连接酶将ΔrfbD缺失突变核与自杀质粒SacB-pUC19连接,获得突变载体SacB-pUC19-ΔrfbD;将SacB-pUC19-ΔrfbD电转化至流产布氏杆菌S2308感受态细胞中,运用sacB反向筛选构建流产布氏杆菌S2308 rfbD无痕突变株,并分析其在巨噬细胞RAW264.7和BALB/c小鼠体内的存活能力。结果显示,成功构建了流产布氏杆菌S2308 rfbD基因缺失株,该突变株在巨噬细胞和小鼠体内毒力减弱,存活能力下降,证明rfbD基因是流产布氏杆菌的毒力相关基因。
- 张敏韩先干田明星单雪芹宋军丁铲刘宗平于圣青
- 关键词：布氏杆菌
- MEK1/2-ERK1/2通路参与硒在高皮质醇水平下对山羊子宫内膜炎症反应的抑制作用
- 2024年
- 为揭示硒在高皮质醇水平下对山羊子宫内膜炎症通路MEK1/2-ERK1/2的影响,采用空怀奶山羊建立子宫内膜炎模型,观察皮质醇和硒对山羊生理指标、子宫内膜组织病理学变化、子宫分泌物以及MEK1/2-ERK1/2通路的影响。结果显示,连续注射7 d皮质醇后,山羊血清皮质醇可维持较高水平;连续补饲酵母硒21 d可维持山羊血清较高的硒水平。灌注大肠杆菌后,山羊的呼吸频率、心率、体温和外周血白细胞数、子宫分泌物中多形核白细胞(PMN)数量以及MEK1/2-ERK1/2通路关键因子表达均升高,子宫组织病理损伤加重。注射皮质醇后,山羊生理指标、子宫分泌物中PMN数量均下降,子宫组织损伤加重;MEK1和MEK2基因表达下降(P<0.05),MEK1/2-ERK1/2通路关键蛋白表达水平下降(P<0.05)。与皮质醇和大肠杆菌共处理组的山羊相比,日粮中补饲酵母硒的山羊的生理指标、子宫分泌物PMN数量进一步下降,子宫组织损伤减轻,MEK1/2-ERK1/2通路被抑制(P<0.05)。结论:日粮中补饲酵母硒可减轻高皮质醇水平下大肠杆菌诱导的山羊子宫内膜的炎症反应,其调控机制可能与MEK1/2-ERK1/2通路有关。
- 张敏张敏郑方玲李俊郭龙李俊董俊升刘康军李建基崔璐莹
- 关键词：酵母硒皮质醇山羊大肠杆菌
- 流产布鲁菌变异株S2308△rfbE感染促进小鼠髓源性树突状细胞(BMDC)成熟和细胞因子释放被引量：2
- 2020年
- 目的研究流产布鲁菌变异株S2308△rfbE感染对小鼠髓源性树突状细胞(BMDC)成熟和免疫应答功能的影响。方法采用流式细胞术检测S2308△rfbE感染小鼠BMDC后主要组织相容性抗原复合体Ⅰ(MHCⅠ)、MHCⅡ、CD40、CD86的表达变化,ELISA检测BMDC的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-10的分泌量。结果S2308△rfbE感染BMDC后,细胞表达MHCⅠ、MHCⅡ、CD40、CD86明显增强,TNF-α、IL-6和IL-10分泌量升高。结论布鲁菌变异株S2308△rfbE促进BMDC成熟和细胞因子分泌。
- 谭婧玉韩先干张敏刘海文
- 关键词：毒力基因
- 华东部分地区鸡艾美耳球虫田间虫株的耐药性调查
- [目的]鸡球虫病是由七种艾美耳属球虫引起的一种胞内寄生虫病,每年都会给养禽业造成巨大的经济损失。鸡球虫病的防治主要依赖于饲料中抗球虫药物的添加,但药物的长期使用不可避免的导致了耐药性的出现。因此,了解不同鸡场中球虫的感染...
- 李雪雁张敏赵其平佘如凤夏溯寒刘博郭双双王霄旸王米张可煜张丽芳刘迎春王春梅薛飞群费陈忠
- 关键词：艾美耳球虫耐药性
- 文献传递
- 类弹性蛋白多肽融合犬β干扰素的表达纯化和抗病毒活性及体外半衰期的研究被引量：4
- 2016年
- 为了研制长效犬β干扰素(Ca IFNb)基因工程产品,用聚合酶链反应从犬基因组DNA扩增Ca IFNb成熟肽编码序列,插入类弹性蛋白多肽(ELP)融合表达载体,将重组载体转化大肠杆菌BLR(DE3),用IPTG诱导Ca IFNb-ELP表达,利用ELP介导的温度敏感可逆相变循环(ITC)进行纯化,用50%细胞病变抑制试验检测干扰素活性,用50%小鼠血浆孵育法检测体外半衰期,并与融合组氨酸标签的His-Ca IFNb进行比较。结果显示,在≤28℃条件下,90%Ca IFNb-ELP为可溶性表达,His-Ca IFNb以不溶性包涵体表达;在优化条件下进行1轮ITC,获得的Ca IFNb-ELP的纯度为96%,显著高于以包涵体纯化的His-Ca IFNb的纯度(85%);Ca IFNb-ELP的抗病毒活性为1×105 U/mg,比His-Ca IFNb的抗病毒活性高10倍;Ca IFNb-ELP的体外半衰期>24 h,显著长于His-Ca IFNb的体外半衰期(12 h)。结果表明,Ca IFNb-ELP具有表达水平高、纯化简单和体外半衰期较长等优点,有望作为长效干扰素开发利用。
- 张敏张鑫宇夏晓莉孙怀昌
- 猪流行性腹泻病毒PEDV SD株的分离及体外3D肠道类器官感染模型建立
- 2024年
- 猪流行性腹泻病毒(PEDV)是一种主要感染仔猪小肠的肠道冠状病毒。本研究旨在建立一种用于PEDV体外研究的仔猪小肠类器官模型。首先从PEDV发病猪场的临床仔猪腹泻样品中分离PEDV并进行全基因组测序,结果显示成功分离1株PEDV,命名为PEDV SD株。另外采用肠道类器官的培养技术,从10日龄健康仔猪小肠中分离小肠隐窝组织,经过体外培养7 d左右分化成具有肠道隐窝结构的猪小肠类器官,并能进行连续传代。然后将分离的PEDV SD株感染传代培养的猪小肠道类器官,通过间接免疫荧光试验显示PEDV可以很好地感染猪小肠道类器官,表明成功建立了PEDV感染肠道类器官的模型。猪小肠类器官感染模型可以在体外很好地重现PEDV感染肠道细胞的复杂结构的过程,为深入研究PEDV的致病机制提供一种新的可再生的体外研究模型。
- 蔡鸿明张敏吕丽蕾姜一峰高飞虞凌雪童武李丽薇李国新周艳君刘长龙童光志
- 关键词：猪流行性腹泻病毒
- 布鲁氏菌脂多糖及其突变株的研究进展被引量：7
- 2013年
- 布鲁氏菌是兼性胞内生长的细菌病原体,其致病机理和胞内存活、复制有关。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是布鲁氏菌外膜的主要成分,由类脂A、核心寡聚糖和O抗原三部分组成,分别由多种与LPS合成相关的酶催化合成。布鲁氏菌LPS在感染中起重要作用,是一种重要的毒力因子。LPS的完整性决定布氏杆菌表型,对光滑型布鲁氏菌LPS合成过程中所需酶的编码基因进行突变可导致产生结构不完整的粗糙型LPS,使其毒力变弱,经常被用作减毒活菌苗候选株进行研究。本文针对布鲁氏菌LPS的结构、生物合成和突变株的研究进展进行简要综述。
- 张敏刘宗平于圣青
- 关键词：布鲁氏菌脂多糖表型
- 实时荧光定量PCR检测RAW264.7巨噬细胞中Th1/Th2型细胞因子转录水平方法的建立及初步应用被引量：3
- 2013年
- 目的建立小鼠RAW264.7巨噬细胞的Th1和Th2型细胞因子荧光定量PCR检测方法。方法依据GenBank中小鼠的β-actin基因序列、Th1型及Th2型细胞因子的核苷酸序列设计特异性引物,以RAW264.7巨噬细胞mRNA反转录后的cDNA为模板,通过构建质粒阳性标准品,建立检测上述细胞因子转录水平的real-time PCR方法。结果用建立的荧光定量PCR方法,检测牛型布鲁氏菌S2308株感染RAW264.7巨噬细胞后,巨噬细胞Th1和Th2型细胞因子的转录水平。最低检测量为102拷贝/μL,线性关系很好,R2≥0.982,该方法具有良好的特异性和重复性。结论成功建立了检测巨噬细胞中Th1和Th2型细胞因子转录水平的荧光定量PCR方法。
- 单雪芹韩先干张敏宋军刘海文田明星潘玲丁铲周锦萍于圣青
- 关键词：TH1TH2型细胞因子布鲁氏菌
