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李志辉: 作品数：11 被引量：43H指数：4; 供职机构：河北农业大学食品科技学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家农业科技成果转化资金转基因生物新品种培育专项更多>>; 相关领域：轻工技术与工程农业科学医药卫生化学工程更多>>

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转cry1Ac基因抗虫水稻环介导等温扩增检测方法的建立及应用被引量：3: 2013年; 为了方便快速地检测转cry1Ac基因抗虫水稻的转基因成分,本研究以转cry1Ac基因水稻‘华恢1号’为主要研究对象,根据环介导等温扩增技术的原理,针对人工改造的cry1Ac晶体蛋白毒素基因的6个区段设计4条特异性引物,在65℃条件下,利用链置换DNA聚合酶等温扩增1h,分别通过荧光显色和凝胶电泳完成对转基因作物的检测工作,同时对2种转基因作物和5种非转基因作物进行LAMP检测以检验该方法的特异性。结果表明,该LAMP方法能有效地检测含有cry1Ac的转基因作物,检测结果与常规PCR方法结果一致,灵敏度是PCR方法的10倍,达到0.01%,并且具有高特异性,表明该检测方法适合转cry1Ac基因抗虫作物的快速检测。; 于妍李志辉王志鑫张先舟张伟檀建新束长龙张杰张永军; 关键词：环介导等温扩增转基因作物

利用枯草芽孢杆菌芽孢展示人APPsw蛋白: 2014年; 为了获得经济高效的人淀粉样前体样蛋白(APPsw)的抗原,本试验将枯草芽孢杆菌的芽胞衣壳蛋白CotG的启动子及其编码序列与穿梭载体pDG150进行重组,构建了芽孢表面展示载体pDG150-cotg。克隆了绿色荧光蛋白(GFP)基因gfp和人淀粉样前体蛋白基因APPsw,并插入pDG150-cotg的多克隆位点构建重组质粒,分别转化枯草芽孢杆菌168,获得工程菌G168和A168。G168芽孢在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,表明GFP得到展示;A168的芽孢通过western bolt检测,检测到102kDa大小条带,表明本研究构建的表面展示载体pDG150-cotg能将APPsw展示在芽孢表面,为后续的免疫试验提供了疫苗材料。; 李志辉张莹莹杜萍萍申培立于妍徐大庆马雯李英军檀建新; 关键词：枯草芽胞杆菌淀粉样前体蛋白 GFP

生香酵母C42真空冷冻干燥保护剂的筛选和优化被引量：6: 2015年; 为了获得生香酵母C42的冷冻干燥保护剂,应用Plackett-Burman(PB)、最陡爬坡和Box-Benhnken(BBD)三种实验设计法对真空冷冻干燥制备生香酵母C42活性干酵母的保护剂进行了优化。结果表明最优的保护剂配方为:2.90%甘油,10.33%棉籽糖,9.63%谷氨酸钠,所得酵母菌的存活率为80.56%±1.19%,为该菌种的保存和后续研究应用打下坚实基础。; 任蓓蕾李志辉田洪涛杜萍萍张莹莹马雯锁然何俊萍檀建新; 关键词：生香酵母冷冻干燥响应面法保护剂

4种食源性致病菌的多重PCR快速检测方法研究被引量：10: 2019年; 为快速检测蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和沙门氏菌4种食源性致病菌,建立4重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的检测方法。针对菌株的特异性基因设计引物,选择退火温度相近,扩增条带区间不同的引物为多重聚合酶链式反应引物组,并对多重PCR的引物浓度、退火温度进行优化,确定扩增条件。结果表明,在54℃的退火温度下,4种菌可扩增长度为246、166、65、107 bp的清晰片段,其检测灵敏度为蜡样芽孢杆菌2×10^1 CFU/mL,金黄色葡萄球菌可达1.3×10^2 CFU/mL,志贺氏菌可达1.3×10^2 CFU/mL,沙门氏菌可达1.4×10^2 CFU/mL。; 李聪刘健慧李志辉张敏高浩檀建新; 关键词：蜡样芽孢杆菌金黄色葡萄球菌志贺氏菌沙门氏菌

一株产耐高温碱性脂肪酶菌株的筛选及产酶条件优化被引量：4: 2015年; 用Tween平板法从采集自河北省的122份土样中筛选到一株脂肪酶活性较高的菌株Lipa1318。综合其形态学和生理生化特征以及16S r DNA的序列比对结果,确定该菌株为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)。其所产胞外脂肪酶的最适反应温度为60℃,最适p H为8.0,是一种耐热的碱性脂肪酶。摇瓶发酵实验证明该菌株的最适产酶条件为:葡萄糖1.0%,牛肉膏1.0%,Triton X-100 1.5%,橄榄油0.50%,Ca Cl20.50mmol/L,发酵液初始p H为8.0,30℃培养96h,通过发酵条件的优化使酶活提高了3.6倍。; 杜萍萍张莹莹申培立李志辉于宏伟卢海强苏旭东张伟檀建新; 关键词：脂肪酶粘质沙雷氏菌发酵条件

变形杆菌环介导等温扩增检测法的可视化方法的比较被引量：4: 2016年; 通过比较现有几种可视化检测环介导等温扩增反应产物的方法,建立一种可视化检测变形杆菌的方法。利用已有的LAMP检测变形杆菌的方法作为出发检测体系,比较了焦磷酸镁反应沉淀观察法和分别单独添加核酸染料SYBR Green I、孔雀绿(Malachite Green)、钙黄绿素-氯化锰(Calcein-MnCl2)的可视化检测方法,结果显示,焦磷酸镁沉淀的指示效果较差,SYBR Green I法会造成实验场所的交叉污染,孔雀绿法指示反应不够灵敏,钙黄绿素-氯化锰法综合考虑较优;并证明该方法用于可视化LAMP检测变形杆菌,具有良好的特异性,灵敏度达到4.8CFU/mL。试验证明钙黄绿素-氯化锰法是一种较优的LAMP可视化检测法。; 申培立王羽李志辉郭梦冉马晓燕张伟马雯李英军檀建新; 关键词：环介导等温扩增变形杆菌

响应面法优化生香酵母C42增殖培养基被引量：2: 2017年; 在摇瓶水平上对生香酵母C42培养基进行响应面法优化。首先用单因子法筛选最优碳源、氮源及无机盐。采用PlackettBurman法筛选影响生香酵母C42生长的主要因素、再利用最陡爬坡试验进行Box-Behnken设计,得到生香酵母C42的优化培养基配比。优化后的培养基组成为葡萄糖7.12%、酵母浸粉3.28%、KH_2PO_4 0.2%、(NH)_2SO_4 0.6%、NaCl 0.5%、MgSO_4 0.03%。优化后的活菌数量可达到1.26×10~9 CFU/mL,比优化前的活菌数7.65×10~8 CFU/mL提高了64.7%。; 郭凯元亢春雨李志辉徐宏伟孙思明任蓓蕾马雯李英军檀建新; 关键词：生香酵母培养基优化响应面法

发酵肠优良菌种的分离及鉴定被引量：2: 2013年; 为了得到优良的发酵肠菌株,从国内外10种传统发酵肠中分离出76种菌,通过溶钙圈筛选、耐受性、抑菌实验和发酵特性实验,最后得到一株特性优良的菌株7-3。该菌株具有较高蛋白酶活性,且能在添加了6g/dL NaCl和150mg/kg NaNO2的MRS培养基中生长良好。通过对该菌株进行形态观察、生理生化实验鉴定及16S rDNA序列同源性的比较,将其鉴定为弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)。本研究得到了发酵特性良好,且耐受性较强的菌种,为肉类发酵剂的制备储备了菌种资源。; 郑乾魏焦学芹淑英石俭李志辉郭鑫; 关键词：发酵肠乳酸菌

一株产谷氨酰胺转氨酶菌株的分离、鉴定及其tgl的克隆表达被引量：2: 2015年; 用稀释平板法从土壤样品中分离到166株细菌菌株,通过凝胶法初筛和Folk比色法复筛,得到一株产谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase)的菌株,通过形态学、生理生化特征和16S rDNA序列比对证明该菌株是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),命名为TGase1318。克隆了该菌株TGase的编码基因tgl,序列长738bp,编码由245个氨基酸组成的蛋白质;TGase的氨基酸序列与NCBI公布的B.subtilis的TGase相似性达94%-100%。用B.subtilis表达载体p TZ和E.coli表达载体p ET21b分别构建了含tgl的重组质粒,转化B.subtilis WB800和E.coli BL21,tgl基因表达产物在70℃下可催化BSA交联,表明tgl在B.subtilis和E.coli中获得了表达且表现出TGase活性,这为其在食品工业上的开发利用打下基础。; 张莹莹石楠杜萍萍申培立李志辉于宏伟卢海强苏旭东张伟檀建新; 关键词：谷氨酰胺转氨酶枯草芽孢杆菌 RDNA

含cry8型基因苏云金芽孢杆菌的分离和鉴定被引量：3: 2014年; 为发掘对蛴螬有防治作用的苏云金芽孢杆菌及其cry基因,在河北省各县市共采集土壤样品254份,采用温度筛选法分离出Bt菌株42株,经PCR-RFLP方法鉴定,其中10株含有cry8型基因。这些菌株有如下特点：同一菌株含1种或多种质粒;PCR-RFLP鉴定证明有多种cry8基因存在,多数菌株中含2种cry8基因,如cry8E和cry8F常共存于同一菌株中;Cry8杀虫晶体蛋白分子量约为130-140 k Da,晶体形态均为球形。这10株菌采样地点分布于保定、衡水、邯郸、廊坊、唐山和邢台等地,植被类型多样化,说明cry8型Bt菌株在河北省分布广泛,可为蛴螬类害虫的防治提供丰富的Bt资源。; 王志鑫束长龙申培立苏旭东李志辉于妍张先舟马雯檀建新; 关键词：苏云金芽孢杆菌基因鉴定 PCR-RFLP 蛴螬

李志辉

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