杜小娟
- 作品数：5 被引量：11H指数：1
- 供职机构：西安交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金陕西省科学技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 丹参素通过激活Wnt/β-catenin通路促进大鼠原代成骨细胞的分化被引量：11
- 2018年
- 目的探讨丹参素对原代培养大鼠成骨细胞分化的影响。方法用不同浓度的丹参素(0.1~10μmol·L^(-1))处理原代培养的大鼠成骨细胞,采用MTT实验检测丹参素对成骨细胞增殖的影响;运用Real-time PCR法检测Runx2和Osterix基因mRNA的表达;利用碱性磷酸酶染色检测细胞ALP的活性;利用茜素红染色检测细胞钙化结节的形成;通过Western Blotting检测细胞核内β-catenin的含量。结果丹参素对成骨细胞的增殖无明显作用,浓度为1~10μmol·L^(-1)的丹参素能够上调Runx2和Osterix基因mRNA的表达,增强ALP的活性,促进钙化结节的形成,增强β-catenin在细胞核内的表达。结论丹参素浓度为1~10μmol·L^(-1)能够促进成骨细胞的分化,且Wnt/β-catenin信号通路被发现参与其对成骨细胞分化过程的调控。
- 闫小飞张富军杜小娟武丽涛李冬民韩燕
- 关键词：丹参素成骨细胞细胞分化Β-CATENIN
- Na^+-K^+-ATP酶α1亚基DR多肽单克隆抗体的制备和应用
- 2016年
- 目的制备钠钾ATP酶(Na^+-K^+-ATPase)α1亚基DR区段(897DVEDSYGQQWTYEQR911)的单克隆抗体(mAb)并鉴定其活性。方法以合成的DR-钥孔戚血蓝素(KLH)为免疫原,免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术建立能稳定分泌抗DR的杂交瘤细胞株,制备Na^+-K^+-ATPaseα1亚基DR mAb。ELISA测定杂交瘤细胞上清中mAb效价,斑点免疫杂交、Western blot法及免疫荧光细胞化学染色法检测单克隆的特异性,采用Senso LyteFDP蛋白磷酸酶定量试剂盒检测Na^+-K^+-ATPase活性,高糖细胞损伤实验检测DR mAb对高糖引起细胞损伤的保护作用。结果成功制备3株稳定分泌抗体的阳性细胞株。选择强阳性DRm217细胞株,制备腹水进一步验证。免疫荧光细胞化学染色、免疫斑点杂交及Western blot法结果显示,DRm217 mAb能够特异性结合在细胞膜表面,识别Na^+-K^+-ATPase的DR多肽。DRm217能够提高Na^+-K^+-ATPase活性,对高糖引起的细胞损伤具有一定的保护作用。结论成功制备了针对Na^+-K^+-ATPase DR多肽的mAb。
- 闫小飞武丽涛杜小娟李靖张福军韩燕吕社民李冬民
- 关键词：单克隆抗体
- 转录因子STAT1两个亚型STAT1α和STAT1β高表达载体的构建及鉴定
- 2016年
- 目的利用高表达载体pLJM1-EGFP构建并鉴定转录因子STAT1基因的2个亚型STAT1α和STAT1β的过表达重组质粒(简称为pLJM1-STAT1α和pLJM1-STAT1β)。方法以大鼠肝脏cDNA为模板,PCR获取目的片段(即STAT1α和STAT1β);用AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切pLJM1-EGFP表达载体和PCR扩增的STAT1α和STAT1β基因片段后,用T4DNA连接酶连接酶切纯化后的载体及目的基因片段;将连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞、挑选阳性克隆,并通过PCR、双酶切和DNA测序鉴定构建的重组质粒。结果 PCR和双酶切证实pLJM1-STAT1α和pLJM1-STAT1β重组载体中分别成功插入了STAT1α和STAT1β基因片段。DNA测序结果表明插入的STAT1α和STAT1β基因片段的序列完全正确。结论成功构建了pLJM1-STAT1α和pLJM1-STAT1β高表达重组载体。
- 李靖伊静蓝茜李玥刘莉梁栋杜小娟武丽涛闫小飞杨旭东张富军吕社民李冬民
- ABCA1敲低对小鼠巨噬细胞中Pam3CSK4引起的炎症反应的双向调节作用
- 2017年
- 目的检测ABCA1敲低对巨噬细胞中Pam3CSK4引起的炎症应答的影响。方法构建小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的ABCA1敲低的稳定细胞系,以TLR2配体Pam3CSK4刺激该细胞系建立炎症反应细胞模型,在该细胞模型上检测相关促炎和抗炎细胞因子转录水平的表达变化。结果 ABCA1敲低的RAW264.7稳定细胞株在Pam3CSK4刺激后,IL-1β,TNF-α和IL-6表达发生显著上调(P<0.01),而转录抑制因子cAMP依赖性转录因子3(ATF3)也发生显著上调(P<0.01);与此同时,ATF蛋白家族中其它因子ATF1,ATF2,ATF4和ATF5转录水平没有发生显著变化。结论在巨噬细胞RAW264.7中,ABCA1敲低显著上调Pam3CSK4引起的促炎因子IL-1β,TNF-α和IL-6的表达的同时,也显著上调了具有抗炎效应的ATF3的表达,其对炎症反应的影响可能并非是单向的促炎作用,而是发生双向的调节,而ABCA1参与上调ATF3表达的机制可能也与其ATF蛋白家族其他成员的上游调节机制不同。
- 李玥李玥武丽涛蓝茜Ezra Kombo Osoro李冬民杜小娟
- 关键词：ABCA1ATF3
- 转录因子Smad2高表达载体的构建和鉴定
- 2015年
- 目的构建并鉴定大鼠转录因子Smad2的高表达载体(简称pLJM1-Smad2)。方法首先以E3大鼠肝脏cDNA为模板、PCR法获取转录因子Smad2 mRNA CDS区(即目的基因片段);然后用Age I、EcoR I双酶切pLJM1-MGFP载体和目的基因片段,用T4DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;之后再将连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,扩大培养并提取重组质粒;最后用PCR、Age I和EcoR I双酶切以及DNA测序鉴定重组质粒。结果 PCR、Age I和EcoR I双酶切结果均提示pLJM1-Smad2重组载体中插入了目的片段Smad2;将含有目的片段的阳性重组体克隆送上海生工进行DNA测序,并将测序结果与NCBI数据库的进行比对,确定插入片段无突变、序列完全正确,证实pLJM1-Smad2重组载体中成功插入了目的基因片段Smad2。结论成功构建了转录因子Smad2的高表达载体pLJM1-Smad2。
- 伊静李靖王璇蓝茜李玥刘莉梁栋杜小娟武丽涛闫小飞杨旭东张富军李冬民
