刘玲红
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项山东省农业重大应用技术创新课题更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 乌苏里貉IgG Fc片段克隆表达及免疫交叉源性分析被引量：1
- 2016年
- 为研究乌苏里貉IgG Fc与犬IgG间的免疫交叉源性,本研究采用斑点酶联免疫吸附法(dot-ELISA)初步确定犬与乌苏里貉血清抗体间存在较强免疫交叉反应源性;通过RT-PCR成功克隆乌苏里貉IgG Fc片段基因,构建pcDNA3.1-IgG(Fc)真核表达质粒,转染HEK293T细胞,借助间接免疫荧光试验(IFA))证实该蛋白成功表达(大小约为22 000),免疫印迹(Western blot)试验证明该蛋白与抗犬IgG存在免疫结合反应。结果表明,乌苏里貉IgG Fc与犬IgG间存在强烈的免疫交叉源性,应用犬源高免血清或犬免疫球蛋白治疗貉犬瘟热具有可行性,同时为今后构建特定抗原基因与IgG Fc基因融合表达载体,研究DNA疫苗及Fc的生物佐剂提供了理论依据。
- 赵翠刘玲红郭树源庞晓茹宋道祯付石军常维山
- 关键词：乌苏里貉真核表达犬瘟热
- 动物源大肠杆菌抗药性检测及多抗高抗菌株ERIC图谱分析
- 2017年
- 为检测山东2016年动物源大肠杆菌的抗药情况,并分析多抗高抗菌株间基因重复一致序列PCR(ERIC-PCR)基因图谱,探讨多抗高抗大肠杆菌ERIC-PCR基因分型与抗药性之间的关系,从患病动物中分离并鉴定猪源和禽源大肠杆菌110株,用琼脂稀释法测定其对10种抗生素的抗药情况,并从中挑选20株多抗高抗大肠杆菌进行ERIC-PCR,根据DNA指纹图谱进行聚类遗传分析。结果表明,猪源大肠杆菌对多类抗生素具有抗药性,对氟苯尼考、多西环素和氨苄西林的抗药率达100%,对头孢噻肟抗药率较低,为57.14%;禽源大肠杆菌也具有高度抗药性,对氟苯尼考抗药率达95.51%,对环丙沙星抗药率最低,为61.80%。ERIC分析显示,多抗高抗菌株谱型分散,为多克隆来源,其基因分型B型与抗药特性之间呈一定相关性。表明,动物源大肠杆菌抗药程度高,且呈现高度多重抗药性,对不同种类抗生素及同类抗生素不同药物之间均存在严重的抗药性。多抗高抗大肠杆菌无明显种属特性,其传播和蔓延对畜牧业发展和公共卫生安全都形成潜在的巨大风险。
- 刘玲红刘玲红胡明骆延波骆延波李璐璐张印齐静张庆刘玉庆
- 关键词：大肠杆菌抗药性ERIC-PCR基因型
- 融合表达禽白血病env基因和IgG-Fc基因对鸡免疫效果研究被引量：1
- 2017年
- 为研究鸡IgG-Fc作为分子佐剂是否能够增强J亚群白血病病毒env基因核酸疫苗的免疫效果,本研究克隆鸡IgG-Fc、禽白血病病毒-J(ALV-J)env基因,通过overlap-PCR将两个基因串联,构建pcDNA-env-Fc重组质粒,转染HEK293T细胞,48 h后经间接免疫荧光试验证明外源基因能够在细胞内表达。将pcDNA-env-Fc重复免疫SPF鸡3次,记录免疫过程中ALV-J env抗体动态变化,通过ELISA试剂盒检测鸡体内ALV-J env基因特异性抗体含量,结果显示第5周ALV-J抗体水平显著高于对照组(p<0.05),尤其是IgG-Fc片段作为分子佐剂比ALV-J env基因疫苗更能显著刺激机体产生抗体。结果表明IgG-Fc片段可以作为ALV-J env基因疫苗有效的分子佐剂。
- 刘玲红赵翠郭浩付石军宋道祯常维山刘玉庆
- 关键词：ALV-JDNA疫苗分子佐剂
- 貉IgG克隆及Fc活性多肽功能分析被引量：1
- 2017年
- 为获得貉IgG抗体序列,分析其活性多肽功能,从而为貉源疾病治疗研究奠定免疫学基础。本研究通过RTPCR成功克隆貉IgG保守区基因,借助3′RACE以及overlap-PCR技术成功获得其IgG全长。运用在线软件分析其Fc区功能位点,人工合成IgG-Fc区多肽NTVSITCLVK(N10K),PSVYVLPPSQ(P10Q)及阴性对照多肽MSTAVSKCAT(NC)。多肽在不同浓度下与小鼠外周血淋巴细胞共培养18h检测上清液中细胞因子含量(TNF-α,IL-1β,IL-6),发现在质量浓度为10mg/L时,多肽N10K可以刺激淋巴细胞分泌更多的TNF-α(271.95ng/L),IL-1β(27.42ng/L),而多肽P10Q可以促进淋巴细胞产生较多的IL-6(35.51ng/L)。本研究成功克隆貉IgG重链核酸序列,初步确定貉IgG-Fc区多肽P10Q及N10K对外周血淋巴细胞的体外免疫诱导活性,同时为今后貉源疾病预防及治疗奠定基础,为研究DNA疫苗、Fc生物佐剂、多肽疫苗及单克隆抗体制备提供了试验依据。
- 赵翠刘玲红王开斌王晓艺付石军宋道祯常维山
- 关键词：克隆
