周玲
- 作品数：5 被引量：24H指数：3
- 供职机构：华南农业大学动物科学学院更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- SADS-CoV S1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：2
- 2023年
- 猪急性腹泻综合征(SADS)是由猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)引起的仔猪急性腹泻、呕吐、脱水、体质量骤降,最终导致死亡的一类急性传染病。为制备SADS-CoV刺突蛋白(S1)的多克隆抗体,通过PCR扩增得到SADS-CoV S1基因片段,并将其克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,构建出重组质粒pGEX-6p-1-S1。测序结果正确后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,经GST标签凝胶纯化。纯化的S1蛋白与弗氏佐剂混合后经3次皮下注射免疫BALB/c小鼠后收集血清,通过免疫印迹试验(Western blot)和间接免疫荧光试验(IFA)进行检测。结果表明,重组的S1蛋白具有良好的反应原性和免疫原性,制备的鼠抗S1蛋白多克隆抗体也具备良好的反应活性和特异性,为后续SADS-CoV血清学诊断方法的建立及S1蛋白生物学功能研究奠定基础。
- 张睿玉李龙驹李程周玲马静云
- 关键词：S1蛋白原核表达多克隆抗体
- 猪圆环病毒3型Cap蛋白的表达纯化及单克隆抗体的制备被引量：8
- 2019年
- 猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3,PCV3)是新近被发现的病原,与之相关的疾病包括母猪繁殖障碍、猪皮炎与肾病综合征、猪呼吸道疾病综合征、仔猪先天性震颤等。本研究采用PCR方法从PCV3/CN/GDLC1/2016株中扩增出衣壳蛋白(Cap)基因,对Cap基因进行序列分析并预测其二级结构,将去除信号肽序列的PCV3 Cap基因片段克隆到表达载体pET-32a(+)中,测序验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达,经镍柱纯化表达蛋白,通过免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体(MAb)。结果表明,重组PCV3 Cap蛋白为包涵体,大小约38 ku,最佳诱导时间为4 h。通过镍柱成功纯化PCV3 Cap蛋白,筛选获得A8F、C6D、C7E、C6E、C9C、C9E、B7D和C11C等8株能稳定分泌抗PCV3 Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株。ELISA结果表明,A8F、C6D、C9E和B7D MAb均属于IgG2b亚类,C7E、C6E和C9C均属于IgM亚类,C11C属于IgG1亚类;A8F、B7D和C11C MAb效价均大于1∶64 000,C9E效价为1∶32 000,C6E效价为1∶8 000,C6D、C7E和C9C效价均为1∶1 000。经Western-blot分析,重组PCV3 Cap蛋白能与抗His标签抗体和抗PCV3 Cap蛋白MAb进行特异性免疫印迹反应,证实表达蛋白具有良好的反应原性。本研究为今后PCV3的防控提供了技术支持和实验基础,具有重要的生产实践意义。
- 陈桂华孙媛周玲李迪白杨麦凯杰高金铭马静云
- 关键词：CAP蛋白原核表达纯化单克隆抗体
- 斜带石斑鱼趋化因子-受体的克隆鉴定及刺激隐核虫感染后的转录表达分析
- 趋化因子是一类由多种多样的细胞分泌的小分子细胞因子，它能够趋化具有与其相应的受体的细胞到炎症或病原体的入侵部位发挥免疫功能。趋化因子-趋化因子受体系统指导了先天性免疫向适应性免疫的过渡，对于维持机体的稳态、抵抗外来病原体...
- 周玲李言伟李安兴罗晓春但学明
- 关键词：斜带石斑鱼刺激隐核虫趋化因子趋化因子受体
- 广东地区2016-2017年规模化猪场腹泻病原调查分析被引量：11
- 2017年
- 为了解广东地区导致猪群腹泻病原的流行状况,对广东省部分地区的猪场进行猪群腹泻的流行病学调查,共采集腹泻样品273份,采用PCR和RT-PCR的方法检测能够造成猪群腹泻的病原,包括猪流行性腹泻病毒(PEDV),猪轮状病毒(PoRV),猪传染性胃肠炎病毒(TGEV),以及近年开始流行的猪德尔塔冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCoV),猪库布病毒(Porcine Kobuvirus,PKoV),猪博卡病毒(Porcine Bocavirus,PBoV),猪萨佩罗病毒(Porcine Sapelovirus,PSV)。检测结果显示,PEDV仍然是导致猪群腹泻的主要病原,而TGEV没有检测到。尤为突出的是PKV仅次于PEDV的高阳性率,因此其在猪群腹泻中的作用值得进一步探索。
- 周玲陈桂华伍子娴麦凯杰李迪王胜阳马静云张祥斌
- 关键词：PCR
- 塞内加谷病毒VP1蛋白的表达纯化及鉴定被引量：3
- 2017年
- 为表达并纯化塞内加谷病毒(Senecavirus A,SVA)的VP1蛋白,克隆SVA的VP1基因,测定其序列并构建遗传进化树,分析VP1蛋白氨基酸突变位点并预测其二级结构。然后将VP1基因克隆至载体pET-32a(+)中,IPTG诱导表达VP1重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析柱纯化并用W estern-blot进行验证。结果显示,表达的VP1重组蛋白的大小为48 ku,主要以包涵体形式存在,能与抗His标签的单克隆抗体发生特异性免疫反应。结果表明成功表达并纯化出VP1重组蛋白。
- 白杨伍绮文陈桂华周玲李怡昀周雯馨马若瑶马静云
- 关键词：VP1蛋白纯化
