周莉
- 作品数：28 被引量：132H指数：5
- 供职机构：贵州大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：贵州省农业科技攻关项目贵州省科学技术基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 犬瘟热病毒贵州株CDV-GZ1的分离与鉴定被引量：3
- 2012年
- 为丰富我国犬瘟热病(CD)的流行病学资料,同时为CDV贵州分离株主要抗原基因及结构研究奠定基础,对贵阳市某宠物医院犬瘟热病毒金标卡检测呈阳性病死犬的肝脏、肺脏、淋巴结等组织,取适量经混合研磨过滤后,同步接种于Vero传代细胞上进行病毒分离培养,并对该分离毒株进行理化特性、电镜形态、血清学和核酸检测等系列鉴定。结果表明:在Vero细胞上盲传至第6代时稳定出现特征性的CPE,该毒株为RNA囊膜病毒,电镜下可见胞浆包涵体、病毒粒子呈晶格状排列,病毒可被犬瘟热阳性血清中和,分离病毒为犬瘟热病毒并被命名为CDV-GZ1株。
- 曾智勇周莉汤德元肖超能刘志杰梁海英
- 关键词：犬瘟热病毒
- 犬瘟热病毒贵州分离株H基因的克隆及其序列分析被引量：1
- 2011年
- 根据GenBank中犬瘟热病毒Onderstepoort株序列设计特异性引物,以犬瘟热病毒贵州分离株（CDV-GZ1）RNA为模板,应用RT-PCR对病毒H蛋白编码基因进行了扩增、克隆及序列分析。测序结果表明,CDV-GZ1 H基因ORF由1 824 bp组成,可编码607个氨基酸;与已发表23株其它CDV H基因核苷酸序列相似性在91.1%~99.6%之间,推导氨基酸序列同源性在91.0%~99.2%之间。GZ1株H蛋白含有5个潜在的N-联糖基化位点,与其他毒株相比,N-联糖基化位点的数目与位置均存在差异。系统进化树分析表明,CDV-GZ1株与德国Snyder Hill株和国内广州分离株（GZ0802）具有较高的同源性,推测这些毒株间可能具有更近的亲缘关系。
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- 关键词：犬瘟热病毒H基因克隆
- 犬瘟热病毒H基因原核表达质粒的构建被引量：1
- 2011年
- 为H蛋白进一步表达作为诊断用抗原、建立特异的犬瘟热病毒(CDV)抗体检测方法及CDV的预防奠定基础,以已构建含有犬瘟热病毒H基因的pMD18-H质粒为模板,利用合成的特异性引物进行PCR扩增,得到1824bp的目的DNA片段,将所得H基因克隆至经相同双酶切处理后的pET32a(+)原核表达载体中,获得重组质粒pET32a(+)-H。测序结果显示,目的基因插入位置和阅读框正确,成功构建了H基因原核表达质粒。
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- 关键词：犬瘟热病毒H基因原核表达
- 副猪嗜血杆菌与猪伪狂犬病毒、猪乙型脑炎病毒混合感染的诊断被引量：2
- 2013年
- 为了研究毕节市某规模化猪场发病情况,试验对送检的副猪嗜血杆菌发病仔猪血清进行了6种病毒病的血清学检测,根据检测结果再结合特定的多重PCR核酸检测技术对感染病原进行了快速确诊。结果表明:该猪场存在副猪嗜血杆菌和猪伪狂犬病毒、猪乙型脑炎病毒的混合感染。
- 刘志杰周莉曾智勇李如举
- 关键词：副猪嗜血杆菌猪伪狂犬病毒
- 犬瘟热病毒N基因原核表达质粒的构建
- 2011年
- 为了对N蛋白表达作为诊断用抗原、检测犬瘟热病毒(CDV)特异性抗体提供参考依据,以已构建的含犬瘟热病毒N基因的pMD18-N质粒为模板,利用特异性引物进行PCR扩增,得到1 572 bp的N基因开放阅读框,将所得N基因克隆至经相同双酶切处理后的pET32a(+)原核表达载体中,获得重组质粒pET32a(+)-N,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。测序结果显示,目的基因插入位置和阅读框正确,经IPTG诱导表达出分子量约为75 kDa的重组N蛋白。
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- 关键词：犬瘟热病毒N基因原核表达
- 犬瘟热病毒贵州株融合蛋白基因原核表达质粒的构建被引量：2
- 2012年
- 为了研究犬瘟热病毒贵州株(CDV-GZ1)完整融合蛋白(F),试验采用PCR方法以pMD18-F质粒为模板,利用特异性引物扩增获得大小为1 989 bp的目的 DNA,并将其克隆至pET32a(+)原核表达载体中,获得重组质粒pET32a(+)-F。结果表明:目的基因插入位置和阅读框均正确,说明F基因原核表达质粒构建成功;质粒pET32a(+)-F在BL21(DE3)中经诱导表达未获目的蛋白,说明CDV融合蛋白可能不适合在该表达系统中进行完整蛋白的表达。
- 曾智勇周莉汤德元刘志杰梁海英
- 关键词：犬瘟热病毒F基因原核表达
- 贵州白香猪的白细胞介素2基因的克隆及其序列分析被引量：1
- 2012年
- 为获得贵州白香猪白细胞介素2基因,以提取的经刀豆蛋白A诱导培养的贵州白香猪外周血淋巴细胞总RNA为模板,扩增全长猪白细胞介素2(IL-2)基因,并克隆至pMD18-T Simple载体后测序。结果表明:贵州白香猪IL-2基因ORF长为465bp,可编码154个氨基酸,其中前20个氨基酸为信号肽,后134个氨基酸为成熟肽,具有一个潜在的N-糖基化位点;贵州白香猪除与FJ543109(99.4%)、Neijiang(98.7%)、JN851821(98.7%)、AB194099(98.5%)氨基酸一致性相对较低外,与其他猪源IL-2的一致性均为100%,而与其他种属动物的IL-2基因氨基酸一致性则较低,为11.9%～75%。
- 曾智勇周莉刘志杰梁海英
- 关键词：贵州白香猪白细胞介素2基因克隆
- 猪繁殖障碍性疾病的病原鉴定被引量：10
- 2011年
- 为了对猪繁殖障碍性疾病病原的快速鉴定提供参考依据,应用ELISA试剂盒对贵州省贵定县某猪场送检经产母猪血清(Serum)进行了猪瘟病毒(CSFV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪圆环病毒(PCV2)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)等6种猪繁殖障碍性病毒性疾病的血清学检测,根据血清学抗体检测结果,再联合PCR核酸检测流产胎儿病料进行确诊。结果表明,根据ELISA抗体检测结果,结合猪场免疫情况,该猪场疑似猪伪狂犬病野毒感染,PRV PCR检测3份病料中有2份呈阳性,为PRV病原的分离鉴定提供了保障。
- 刘志杰李如举周莉曾智勇汤德元王彬甘振磊王凤
- 关键词：繁殖障碍性疾病PCRELISA病原鉴定
- 猪伪狂犬病病毒GZ-Z1株的分离鉴定被引量：15
- 2011年
- 为获得1株猪伪狂犬病病毒贵州分离株,将贵阳市某猪场送检的流产胎儿病料经一系列处理后接种Vero细胞,并对分离毒株分别进行了病毒理化特性、电镜形态观察、中和试验、动物接种试验、核酸检测等鉴定。当盲传至第3代时,出现细胞变圆变亮、脱落、呈拉网状特征的细胞病变;分离毒不耐酸和热,对5-碘脱氧尿核苷和有机溶剂氯仿敏感,能被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和;透射电镜下可见位于囊泡中呈近圆形、有囊膜、150～180 nm大小的成熟病毒粒子,在胞核中可见衣壳呈晶格状排列的病毒包涵体以及空心、实心2种无囊膜的病毒粒子;将分离毒株接种家兔,能引起家兔奇痒、麻痹死亡;PCR扩增产物经测序证明系PRV gD基因的部分序列。结果表明,成功分离获得了1株猪伪狂犬病病毒贵州株。
- 曾智勇周莉汤德元梁海英刘志杰李谦肖超能王彬王凤甘振磊
- 关键词：猪伪狂犬病病毒
- 犬瘟热病毒贵州株(CDV-GZ1)F基因的克隆及序列分析被引量：4
- 2012年
- 根据GenBank中发表的犬瘟热病毒Onderstepoort株融合蛋白基因(F)序列设计两对特异性引物,采用RT-PCR扩增犬瘟热病毒贵州分离株(CDV-GZ1)的F基因,并进行克隆与序列分析。结果显示,CDV-GZ1株F基因的ORF全长1989bp,氨基酸序列中具有5个潜在N-糖基化位点,氨基酸同源性与美国00-2601株和国内HL株较高,分别为91.6%和91.1%,表明该分离株与00-2601株和HL株具有较近的亲缘关系。
- 曾智勇周莉刘志杰
- 关键词：犬瘟热病毒F蛋白克隆
