孙蓓蓓
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 供职机构：南京工业大学生物与制药工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划江苏省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 地衣芽孢杆菌YP1A耐有机溶剂蛋白酶基因的克隆与功能表达被引量：5
- 2009年
- 根据B.licheniformisYP1A来源的碱性蛋白酶具有的高强度耐有机溶剂性能及相关数据库分析,采用PCR克隆B.licheniformisYP1A耐有机溶剂碱性蛋白酶基因,序列分析显示该基因(1 264 bp)包含启动子与编码380个氨基酸的开放阅读框(ORF),ORF包括信号肽、前肽及编码254个氨基酸的成熟肽序列。相关基因分析表明,YP1A耐有机溶剂碱性蛋白酶基因与地衣芽孢杆菌ATCC14580的碱性蛋白酶基因仅有6个氨基酸残基差异。构建2种含YP1A碱性蛋白酶CDS的组成型穿梭表达载体pHY/aprYP与pHY/aprP43,前者采用YP1A蛋白酶自带的启动子,后者则采用来自于质粒pP43NMK的P43强启动子。利用这2种表达载体在枯草芽孢杆菌WB800中成功进行蛋白酶的功能表达,其中P43强启动子的表达能力明显优于碱性蛋白酶自带的启动子,表达的蛋白酶比酶活为395 U/mL。重组菌表达的碱性蛋白酶在体积分数50%的亲水及疏水有机溶剂中表现出了很好的耐受性,验证了克隆基因为地衣芽孢杆菌YP1A的高强度耐有机溶剂碱性蛋白酶基因。
- 何小丹李霜孙蓓蓓何冰芳
- 关键词：克隆
- 高强度耐有机溶剂蛋白酶的纯化及性质被引量：2
- 2008年
- 分离纯化了自行筛选的耐有机溶剂的地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis YP1所产的溶剂稳定性蛋白酶.发酵液经硫酸铵沉淀、疏水层析及强阳离子交换层析纯化,得到电泳纯的蛋白酶;分子量约为28kDa,纯化蛋白酶的比酶活达到1.18×105U/mg,纯化倍数为37.2,酶活回收率为20.8%.纯化的YP1蛋白酶对50%(φ)的多种亲水或疏水有机溶剂具有很高的耐受性,其中50%(φ)的DMF和DMSO能显著促进YP1蛋白酶活力.YP1蛋白酶为Zn2+蛋白酶,最适反应温度为55℃,最适反应pH为10.0,pH8.0～13.0范围内具有高活力.以酪蛋白为底物,YP1蛋白酶的米氏常数Km为0.048g/L.
- 姚忠孙蓓蓓李霜何冰芳
- 关键词：碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌纯化
