韩磊
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：青岛农业大学农学与植物保护学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 马铃薯PVY和PLRV病毒的TC-RT-PCR检测被引量：1
- 2016年
- 传统的RT-PCR技术检测病毒需提取总RNA,RNA容易降解。利用试管捕捉反转录扩增(Tube cap-ture RT-PCR,TC-RT-PCR)方法检测了PVY和PLRV 2种病毒,实现了不需提取总RNA也可在同一反应中同时检测2种病毒。根据已报道的引物用TC-RT-PCR的方法对PVY和PLRV的外壳蛋白基因进行了检测。结果表明,TC-RT-PCR能够成功的检测出感染PVY或PLRV以及2种病毒共同侵染的样品,扩增产物序列长度均与设计片段的长度相符,分别为781和364 bp,2种病毒扩增产物的测序结果同Gene Bank中已知的序列比对后的同源性均高达97%以上。该技术为单独或复合感染的马铃薯病毒的检测提供了更加方便、高效的方法。同时测得试验PVY病毒样本属于PVYNW株系。
- 郑叶叶韩磊迟胜起张剑峰
- 关键词：PVYPLRV
- 番茄褪绿病毒CP基因克隆、序列分析及原核表达
- 2016年
- 为制备番茄褪绿病毒（Tomato chlorosis virus,To CV）抗血清,以番茄病叶为试验材料,提取总RNA,根据To CV CP基因设计特异性引物,利用RT-PCR方法克隆目的基因,构建原核表达载体p ET32a-To CVCP,在大肠杆菌Rosetta（DE3）菌株中表达CP蛋白。结果表明：To CV CP基因（Gen Bank登录号：KT809400）全长774 bp,编码257个氨基酸,与Gen Bank中其他地区分离物核苷酸序列同源性为97.2%～99.6%,推导的氨基酸序列同源性为97.3%～100.0%。核苷酸序列保守位点占全部位点的91.3%,氨基酸序列保守位点占全部位点的88.3%,表明不同地理来源的番茄褪绿病毒的CP基因保守性较高。将To CV CP基因克隆到原核表达载体p ET-32a（＋）上,并在体外条件下诱导表达出融合蛋白。SDS-PAGE分析表明,转p ET32a-To CVCP载体的大肠杆菌Rosetta（DE3）菌株表达了分子量约33 k Da的重组蛋白。该重组蛋白在37℃,1.0 mmol/L IPTG、诱导6 h,表达量最大。
- 韩磊迟胜起张剑峰
- 关键词：外壳蛋白基因原核表达基因克隆
- 马铃薯纺锤块茎类病毒内蒙古分离株的克隆及序列分析被引量：1
- 2016年
- 采用内蒙古自治区采集的感染马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)的马铃薯材料,克隆了PSTVd的全长基因,命名为内蒙古分离株(PSTVd-IM),对其序列进行分析。结果表明,该序列大小为359 bp,其与俄罗斯的PSTVd分离株(EF044305.1)序列吻合。将该分离物与国内外已经报道的PSTVd株系进行了比较,构建了系统进化树,确定了其分类地位;通过序列比对和二级结构分析,发现PSTVd-IM与已报道的PSTVd三类致病类型株系:强株系(U23058.1)、中间株系(AY937179.1)和弱株系(M14814.1)的同源性分别为97.78%,98.61%和99.44%;且与这三种类型株系在中央保守区、致病区和可变区结构域存在差异,说明这些结构域可能与其致病性相关。PSTVd-IM的序列与二级结构分析有利于明确其来源及致病性的差异位点,对于PSTVd的致病机制的研究具有重要意义。
- 王建迟胜起韩磊张剑峰梁文星
- 关键词：马铃薯纺锤块茎类病毒反转录-聚合酶链式反应
