何文婧
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：华南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 斜纹夜蛾中肠糖代谢相关基因的克隆及表达模式分析被引量：1
- 2013年
- 斜纹夜蛾Spodoptera litura是一种世界性分布的重要农业害虫,在生长发育过程中要经历幼虫一蛹的变态发育过程。由于变态发育前后昆虫的食性发生了明显的改变,作为食物消化吸收的中肠也发生了解体和重建。与此相适应,昆虫中肠的各种物质和能量代谢也可能会相应地发生改变。为研究斜纹夜蛾中肠变态发育过程中糖代谢途径的变化情况,我们从斜纹夜蛾中肠EST文库中鉴定出了12个糖代谢相关基因,克隆了其中3个基因的全长cDNA,并应用半定量PCR和定量PCR的办法检测了其在幼虫-蛹变态发育期中肠组织的转录表达以及对激素和饥饿等因素的响应情况。结果表明:这3个基因(α-L-岩藻糖苷酶、N-乙酰葡萄糖胺-6-磷酸去乙酰酶和烯醇化酶基因)的开放阅读框分别为1 461,1 200和1 299 bp,预测的分子量分别为56.3,43.3和46.7 kDa。这12个糖代谢相关的基因在变态发育期的中肠组织中具有5种不同的mRNA表达模式:(Ⅰ)只在幼虫期高表达(唾液麦芽糖酶前体蛋白、糖基水解酶31家族成员蛋白、线粒体乙醛脱氢酶、β-1,3-葡聚糖酶基因);(Ⅱ)只在预蛹期高表达(β-葡萄糖醛酸酶、β-N-酰基氨基葡萄糖苷酶3基因);(Ⅲ)只在蛹期高表达(葡萄糖胺-6-磷酸异构酶基因);(Ⅳ)在预蛹期和蛹期高表达(α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶、N-乙酰葡糖胺-6-磷酸脱乙酰酶和α-L-岩藻糖苷酶基因);(V)在变态发育期恒定表达(烯醇化酶基因)。这说明,为适应变态发育斜纹夜蛾中肠糖代谢途径发生了明显的改变。保幼激素对这些基因的表达没有明显的影响,但蜕皮激素对Ⅰ类基因(如糖基水解酶31家族成员蛋白基因)具有一定的抑制作用,对Ⅲ类基因(如葡萄糖胺-6-磷酸异构酶基因)有显著的上调作用。此外,我们还发现饥饿对几乎所有这些基因的表达都有显著的抑制作用。这些结果表明,昆虫中肠变态发育过程中糖代谢相关�
- 罗婉冰何文婧黄玉秋胡丹黄立华冯启理
- 关键词：斜纹夜蛾变态发育糖代谢保幼激素饥饿中肠
- 斜纹夜蛾酵母双杂交文库的构建及其在蜕皮激素受体互作蛋白筛选中的应用被引量：1
- 2016年
- 【目的】蜕皮激素在昆虫变态发育中起着关键的调控作用。蜕皮激素活化为20-羟基蜕皮酮（20-hydroxyecdysone,20E）后与蜕皮激素受体二聚体〔蜕皮激素受体（ecdysone receptor,EcR）和超气门蛋白（ultraspiracle protein,USP）〕结合,启动20E诱导的级联反应。本研究旨在从互作蛋白角度探究EcR/USP自身调控的分子机理。【方法】以重要农业害虫斜纹夜蛾Spodoptera litura为研究对象,通过构建酵母双杂交筛选系统分别筛选了与EcR和USP相互作用的蛋白。【结果】文库转化效率达到3.0×106cfu/μg,文库滴度达到1.3×108cfu/m L,文库插入片段大小在500~2 000 bp之间。4种诱饵质粒（EcRA/p GBKT7,EcRB1/p GBKT7,USP1/p GBKT7和USP2/p GBKT7）对酵母细胞无毒性,并且无自激活性,说明构建的酵母双杂交文库质量可靠。用以上4种诱饵质粒筛选酵母双杂交文库,共得到110个互作蛋白,其中与EcRB1,USP1和USP2互作的蛋白分别有26,52和32个,未筛选到与EcRA互作的蛋白。随后,从中挑选了Dna J-5（Hsp40 homolog 5,一种热激蛋白分子伴侣）,MBF2（mediator of Bm FTZ-F1 type 2,一种转录共激活子）,polyubiquitin（多聚泛素类蛋白）,esr16（ecdysteroid regulated 16k Da protein,一种蜕皮激素调控蛋白）和NEDD8-like（neural precursor cell expressed,developmentally down-regulated protein 8,一种泛素调节相关蛋白）5种蛋白,利用酵母双杂交和Far-Western印迹法进一步验证了蛋白间的互作关系。【结论】分子伴侣和泛素化修饰等在蜕皮激素受体调控中可能起着重要作用。本研究对深入理解昆虫变态发育的分子机理具有重要意义。
- 范琳芳何文婧苏智仁朱家明罗威张纯黄立华
- 关键词：斜纹夜蛾变态发育
