张世芳 作品数:5 被引量:20 H指数:3 供职机构: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
山羊myostatin基因慢病毒RNA干扰载体的构建及效果验证 被引量:1 2012年 myostatin基因是肌肉生长和发育的关键负调控因子之一,该基因突变或失活的物种都呈现肌肉增大的双肌表型,暗示在家畜中使该基因失活可以增加其产肉量。为了进一步揭示myostatin在山羊胎儿成纤维细胞中的生物学功能以及制备可有效失活myostatin基因的工具,将筛选的myostatin基因潜在RNA干扰靶位点连接到慢病毒干扰载体的转移质粒中,构建慢病毒介导的RNA干扰载体,验证其干扰效果。结果表明,干扰序列与转移质粒连接正确,成功构建myostatin基因慢病毒干扰载体,慢病毒三质粒共转293T细胞,获得的慢病毒颗粒可高效转染山羊胎儿成纤维细胞,Real-time PCR检测发现慢病毒干扰载体Lv322有效减少山羊胎儿成纤维细胞中myostatin基因mRNA 75%的表达(P<0.01),Western blotting检测显示myostatin蛋白则有效降低了94%(P<0.01)。本试验为研究myostatin基因的功能及制备失活转基因动物提供有效工具以及理论基础。 陆健 张世芳 张小宁 刘佳森 李碧春 赵福平 张莉 魏彩虹 杜立新关键词:MYOSTATIN基因 慢病毒载体 RNA干扰 绵羊体重性状全基因组关联分析 被引量:10 2014年 本研究旨在利用全基因组关联分析方法(genome-wide association studies,GWAS)挖掘影响绵羊体重性状的遗传标记和功能基因。采用Illumina OvineSNP50BeadChip中密度商业化羊芯片,对3个品种(苏尼特羊、德国肉用美利奴羊和杜泊羊)共计329只绵羊的体重性状(初生重、断奶重、6月龄重、断奶前日增重、断奶后日增重、日增重)进行GWAS分析。统计分析和基因注释基于TASSEL软件、混合线性模型和2012年10月公布的最新版绵羊基因组Ovis_aries_v3.1序列信息。结果表明,有10个SNPs位点在全基因组显著水平上与断奶后日增重相关,部分位点分布在羊注释基因内(MEF2B、RFXANK等);除此之外还检测到22个SNPs在染色体显著水平上与其他体重性状存在相关性,获得一批重要的候选基因。这些基因对绵羊体重性状功能基因的挖掘具有重要的理论意义和参考价值。 张莉 刘佳森 徐凌洋 赵福平 陆健 张世芳 王慧华 张晓宁 魏彩虹 陆国彬 郑友民 杜立新关键词:绵羊 体重性状 全基因组关联分析 深度测序鉴定绵羊microRNA转录组 被引量:4 2013年 本研究采集的Texel绵羊胎儿的背最长肌样品包括5个发育阶段:70、85、100、120和135 d。通过采用Solexa测序技术对混池样品进行了microRNA(miRNA)深度测序,获得了16532850条原始序列读数。使用ACGT101-miR v4.2分析软件对miRNA测序数据进行了深度发掘;通过与最新的哺乳动物成熟miRNA序列(miRNA数据库:miRBase v17.0)、miRNA前体序列、绵羊基因组序列(绵羊基因组数据库,2010年2月)的比对分析,对绵羊microRNA转录组数据库进行了大幅更新,pre-miRNA(miRNA前体)序列增至1529条,编码的miRNA成熟体序列增至1999条。通过实时荧光定量PCR技术对深度测序获得的5个miRNA在混池样品中进行了验证。绵羊miRNA的研究起步较晚,而miRNA的发现与鉴定将促进基因调控机制及miRNA功能的研究。 张世芳 魏彩虹 陆健 张小宁 周鑫磊 张淑珍 王光凯 曹家雪 赵福平 张莉 杜立新牛SLC27A1基因SNPs筛选及其与中国荷斯坦奶牛产奶性状的关联分析 被引量:4 2010年 [目的]对牛SLC27A1基因进行SNPs筛选并与中国荷斯坦奶牛的产奶性状进行关联分析,以期发现对中国荷斯坦奶牛产奶性状有显著影响的SNP位点。[方法]根据性能测定记录选取48头中国荷斯坦奶牛,提取血样DNA,组成2个DNA池,用于SNPs筛选,采用PCR-SSCP和克隆测序方法对DNA池进行SLC27A1基因SNPs筛选。针对发现的SNP位点,采用PCR-RFLP方法对另外231头中国荷斯坦奶牛进行群体基因型检测,采用SAS(8.02)GLM过程对各基因型与产奶性状进行关联分析。[结果]在exon3发现T112C位点,在3‘UTR发现G64A位点,T112C为同义突变;经PCR-RFLP检测,发现在T112C位点存在TT、TC、CC3种基因型,G64A位点存在GG、GA、AA3种基因型。2个位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态。T112C位点的CC型个体的产奶量极显著高于TC型个体(P<0.01),3种基因型对乳蛋白率和乳脂率影响均不显著(P>0.05),乳蛋白率呈现CC>TC>TT的趋势,乳脂率呈现TT>TC>CC的趋势;G64A位点3种基因型对产奶量、乳蛋白率、乳脂率的影响均不显著(P>0.05),但产奶量呈现GA>GG>AA的趋势,乳蛋白率和乳脂率呈现AA>GG>GA的趋势。[结论]该基因T112C位点与产奶量性状有一定的关联性,通过提高CC基因型频率有望提高中国荷斯坦奶牛的产奶量,SLC27A1基因可作为调控中国荷斯坦奶牛产奶量的候选基因,同时为该基因的标记辅助育种和进一步研究奠定了良好基础。 吕延飞 魏彩虹 张莉 路国彬 刘开东 陆健 孙丹 张世芳 柳楠 杜立新关键词:SNPS PCR-SSCP PCR-RFLP 产奶性状 牛SLC27A1基因SNPs筛选及其与中国荷斯坦奶牛产奶性状的关联分析(英文) 被引量:1 2010年 [目的]对牛SLC27A1基因进行SNPs筛选并与中国荷斯坦奶牛的产奶性状进行关联分析,以期发现对中国荷斯坦奶牛产奶性状有显著影响的SNP位点。[方法]根据性能测定记录选取48头中国荷斯坦奶牛,提取血样DNA,组成2个DNA池,用于SNPs筛选,采用PCR-SSCP和克隆测序方法对DNA池进行SLC27A1基因SNPs筛选。针对发现的SNP位点,采用PCR-RFLP方法对另外231头中国荷斯坦奶牛进行群体基因型检测,采用SAS(8.02)GLM过程对各基因型与产奶性状进行关联分析。[结果]在exon3发现T112C位点,在3‘UTR发现G64A位点,T112C为同义突变;经PCR-RFLP检测,发现在T112C位点存在TT、TC、CC3种基因型,G64A位点存在GG、GA、AA3种基因型。2个位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态。T112C位点的CC型个体的产奶量极显著高于TC型个体(P<0.01),3种基因型对乳蛋白率和乳脂率影响均不显著(P>0.05),乳蛋白率呈现CC>TC>TT的趋势,乳脂率呈现TT>TC>CC的趋势;G64A位点3种基因型对产奶量、乳蛋白率、乳脂率的影响均不显著(P>0.05),但产奶量呈现GA>GG>AA的趋势,乳蛋白率和乳脂率呈现AA>GG>GA的趋势。[结论]该基因T112C位点与产奶量性状有一定的关联性,通过提高CC基因型频率有望提高中国荷斯坦奶牛的产奶量,SLC27A1基因可作为调控中国荷斯坦奶牛产奶量的候选基因,同时为该基因的标记辅助育种和进一步研究奠定了良好基础。 吕延飞 魏彩虹 张莉 路国彬 刘开东 陆健 孙丹 张世芳 柳楠 杜立新关键词:SNPS PCR-SSCP PCR-RFLP 产奶性状