王乐乐
- 作品数：11 被引量：15H指数：2
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校优势学科建设工程资助项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 大量制备毒害艾美耳球虫配子体方法的研究被引量：4
- 2016年
- 鸡经嗉囊接种毒害艾美耳球虫孢子化卵囊148 h后,从鸡小肠中段分离成熟的第二代裂殖子;经外科手术方法,将第二代裂殖子直接注入鸡盲肠内,使第二代裂殖子同步发育至配子体;手术后30 h剖检鸡,刮取盲肠黏膜,随后依次通过透明质酸酶消化、滤膜过滤、红细胞裂解、Percoll密度梯度离心等步骤,分离、纯化毒害艾美耳球虫配子体。结果显示,通过本方法分离、纯化的配子体纯度高、数量多,可用于基因转录组学、蛋白质组学、免疫学和疫苗等方面的研究。
- 贾传礼宿世杰侯照峰王乐乐刘丹丹许金俊陶建平
- 关键词：毒害艾美耳球虫配子体纯化
- 毒害艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA文库的构建
- 2015年
- 本文采用Trizol试剂提取毒害艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA,用oliogo（d T）磁珠法纯化m RNA后,采用SMART技术构建了毒害艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA噬菌体表达文库。经鉴定,原始文库容量为2.14×106pfu/m L,扩增后的文库容量为4.47×1010pfu/m L,扩增文库的重组率为90%。随机挑取100个单克隆,通过菌液PCR检测得知文库插入片段长度以400～1000 bp为主。本研究结果为毒害艾美耳球虫新基因的筛选和功能研究奠定了基础。
- 蔡秀清刘丹丹宿世杰王乐乐贾传礼许金俊陶建平
- 关键词：毒害艾美耳球虫第二代裂殖子CDNA文库
- 毒害艾美耳球虫氧化还原酶EnOXIO1的原核表达与定位分析被引量：1
- 2022年
- 旨在探析毒害艾美耳球虫氧化还原酶EnOXIO1的功能。提取毒害艾美耳球虫扬州株配子体总RNA,应用RT-PCR获取EnOXIO1编码基因,构建原核表达载体pET-28a(+)-EnOXIO1,转化至大肠杆菌BL21(DE3),体外诱导表达,对重组蛋白进行抗原性分析,应用制备的多抗进行激光共聚焦免疫荧光定位。结果显示,获得的EnOXIO1基因全长为2535 bp,体外重组表达的蛋白大小约100 ku,主要以包涵体的形式存在,表达量约为0.5 mg·mL^(-1)。Western blot分析结果显示,该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体识别,同时能被制备的鼠多抗以及毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别,表明该重组蛋白具有较好的反应原性和交叉反应原性。激光共聚焦免疫荧光定位结果显示,EnOXIO1基因表达产物主要存在于配子体内的成壁体上,参与了卵囊壁的形成。本研究成功克隆和表达了毒害艾美耳球虫EnOXIO1蛋白,并将其定位于配子体和卵囊壁上,为进一步解析EnOXIO1蛋白参与卵囊壁形成的分子机制奠定基础,为研制新型免疫阻断型球虫亚单位疫苗提供重要靶抗原。
- 叶状王乐乐汪飞燕刘悦彭月梅宿世杰宿世杰许金俊陶建平许金俊
- 关键词：毒害艾美耳球虫克隆表达免疫荧光定位
- 四种鸡艾美耳球虫实验室保存株的PCR鉴定被引量：4
- 2017年
- 以4种鸡球虫实验室保存株(毒害、巨型、柔嫩、堆型艾美耳球虫)的基因组DNA为模板,分别用针对4种球虫的ITS-1序列设计的种特异性引物进行PCR扩增,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析,观察特异性条带。结果显示,只有在模板和扩增引物为同一种球虫时,方能扩增出特异性条带。表明本实验室保存的4种鸡球虫均为纯种株,建立的PCR检测方法可以用于鸡球虫纯种的鉴定。
- 李巧巧王乐乐刘丹丹许金俊陶建平
- 关键词：艾美耳球虫纯种PCR鉴定
- 不同感染剂量对毒害艾美耳球虫繁殖力的影响被引量：2
- 2019年
- 为研究不同感染剂量对毒害艾美耳球虫繁殖力的影响,设4个感染剂量组:500、2 500、5 000和10 000个孢子化卵囊/鸡,每组5只23日龄雏鸡,经鸡嗉囊接种卵囊。感染后鸡粪便中出现卵囊起至第16天,每天用麦克马斯特氏法对各组粪便中卵囊进行计数;在感染后第16天扑杀鸡,取盲肠进行卵囊计数。结果显示,各试验组鸡均无发生死亡,但10 000个卵囊感染组的临床症状最为严重;感染后144 h粪便中查见卵囊,500、2 500和5 000个卵囊感染组均出现2个排卵囊峰值,10 000个卵囊感染组只出现1个峰值,在第7～13天产出的卵囊量均占总产量的94.74%以上;每鸡粪便中排出的卵囊数随感染剂量的增加而增多,但单个卵囊的产量随感染剂量的增加而减少;感染后第16天盲肠中卵囊数不到总卵囊量的1%。结论:在疫苗生产或增殖传代时,感染剂量可选择10 000个卵囊/鸡,在感染后第7～13天收集粪便中卵囊。
- 汪飞燕闫欣刘悦王乐乐李文静徐向东许金俊许金俊刘丹丹
- 关键词：毒害艾美耳球虫繁殖力
- 弓形虫ChineseⅠ型虫株试验感染仔猪组织病理学观察及虫体动态分布被引量：2
- 2021年
- 为研究弓形虫ChineseⅠ型虫株感染仔猪的组织病理变化及虫体动态分布,本研究将YZ-1株速殖子通过静脉注射的方法感染仔猪,于感染后第10、25、50、80天,采集不同组织脏器,制作组织病理切片观察病理变化,并提取各组织器官的基因组DNA分别进行弓形虫529 bp重复序列及B1基因的PCR检测。结果显示,弓形虫急性感染可引起仔猪发病和死亡,病变主要发生在肺脏、肝脏、脾脏和淋巴结等组织,慢性感染病变则主要表现在脑和肺脏;弓形虫感染后第10天,感染仔猪21个主要组织脏器均能检测到弓形虫特异性基因,随着感染时间的延长,虫体分布的组织数量逐渐减少,其中脑、肺脏和肾脏持续时间最长,显示为弓形虫最主要的靶器官,至感染后第80天,所有组织脏器均未再检测到弓形虫特异性基因。研究结果揭示了弓形虫ChineseⅠ型株诱导仔猪的组织病理学特征及虫体动态分布,为猪弓形虫病的临床病理和分子诊断提供了理论依据。
- 候照峰王乐乐赵振兴朱世范苏丁泽阳蔡为民刘丹丹许金俊潘志明陶建平
- 关键词：弓形虫组织病理学
- 毒害艾美耳球虫蔗糖非酵解解旋酶2基因片段的克隆与原核表达被引量：1
- 2017年
- 为了研究毒害艾美耳球虫蔗糖非酵解解旋酶2(SNF2)基因的功能,以提取的毒害艾美耳球虫子孢子总RNA为模板,应用RT-PCR技术扩增SNF2基因片段,克隆至pGEM-T-Easy载体,测序后构建pET30a-EnSNF2表达载体,转化大肠杆菌BL21,重组菌经测序鉴定后诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定。结果显示:克隆的片段长822 bp,编码274个氨基酸;重组蛋白大小为36 ku左右,以包涵体形式为多,能被组氨酸(HIS)单抗特异性识别,表明该基因片段获得成功表达。研究结果为制备针对毒害艾美耳球虫SNF2的多抗和进一步研究该基因的功能奠定了基础。
- 马艺飞杜彩娟王乐乐刘丹丹许金俊陶建平
- 关键词：毒害艾美耳球虫
- 毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的原核表达与分析被引量：1
- 2024年
- 旨在研究毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的反应原性及其在虫体内的亚细胞定位。提取毒害艾美耳球虫(扬州株)配子体总RNA,RT-PCR扩增En GPX的ORF编码序列,构建原核表达质粒pET-28a(+)-En GPX,转化至BL21(DE3)进行体外诱导表达,同时制备鼠抗rEnGPX多克隆抗体,对重组蛋白进行Western blot反应原性分析和激光共聚焦免疫荧光定位分析。结果表明,En GPX ORF序列全长753 bp,编码250个氨基酸,体外重组表达蛋白大小约30 ku,主要以包涵体形式存在。该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体,鼠抗rEnGPX多克隆抗体,毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别,表明其具有较好的反应原性和交叉反应原性。在天然配子体蛋白中检测出EnGPX,其编码蛋白主要分布于配子体内的Ⅱ型成壁体(WFBII)及卵囊壁上。本研究成功克隆表达了毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX,验证其具有良好的反应原性,并定位于配子体及卵囊壁上。以期为研究En GPX参与卵囊壁形成的分子机制提供新的线索,也为研制新型球虫亚单位疫苗提供新的靶标。
- 彭月梅叶状汪飞燕王礼跃冯永翠王乐乐候照峰许金俊许金俊刘丹丹
- 关键词：毒害艾美耳球虫克隆表达反应原性免疫荧光定位
- 毒害艾美耳球虫配子体抗原EnGAM22单克隆抗体的制备与鉴定
- 2022年
- 旨在制备毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)配子体抗原EnGAM22单克隆抗体,用Ni-NTA亲和层析纯化的重组抗原rEnGAM22免疫BALB/c小鼠,免疫3次后,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用预先建立的ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,经有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行4次亚克隆后,获得2株能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株并命名为2F3和3D3;对单抗亚类和特异性进行鉴定,应用单抗识别天然蛋白和虫体定位。结果显示,单克隆抗体2F3和3D3亚类分别为IgG2a、IgG2b,纯化后腹水效价分别为1∶256000、1∶64000,能特异性识别重组抗原rEnGAM22和毒害艾美耳球虫天然配子体蛋白;免疫荧光定位显示单克隆抗体2F3和3D3能特异性识别大配子体的成壁体和卵囊壁,表明EnGAM22抗原参与卵囊壁的形成。制备的单克隆抗体为研究球虫卵囊壁形成的分子机制奠定了基础。
- 蔡为民李文静王乐乐苏丁泽阳朱玉刘丹丹许金俊陶建平
- 关键词：毒害艾美耳球虫单克隆抗体
- 基于全长转录组测序与比较转录组学分析挖掘毒害艾美耳球第三代裂殖子中染色质重塑相关基因
- 毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)是引起8周龄以上的鸡急性发病死亡的一种顶复门原虫。之前的研究显示,顶复门原虫的基因组中缺乏其他真核生物典型的转录因子,却出现了大量的染色质重塑等表观遗传学机制。深入了解球...
- 宿世杰王乐乐候照峰高阳刘丹丹许金俊陶建平
- 关键词：毒害艾美耳球虫
- 文献传递
