邹倩
- 作品数:4 被引量:10H指数:2
- 供职机构:解放军451医院更多>>
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- Notch3过表达对心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的抑制作用被引量:2
- 2017年
- 目的:探讨Notch3过表达对心肌成纤维细胞(CFs)向肌成纤维细胞(MFs)转化的作用。方法:用胶原酶消化法分离培养SD仔鼠的CFs,将CFs于10ng/ml转化生长因子-β1(TGF-β1)中孵育24h,用羟脯氨酸试剂盒检测细胞上清羟脯氨酸含量,免疫荧光法检测CFs中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,用Western-blotting检测Notch3蛋白表达;利用慢病毒转染CFs,使其过表达Notch3,确定最佳转染条件为感染复数(MOI)20,转染时间72h,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,Western-blotting检测Notch3过表达效率;用羟脯氨酸试剂盒检测细胞上清羟脯氨酸含量,免疫荧光法检测CFs中α-SMA表达。结果:10ng/ml TGF-β1可显著诱导CFs细胞上清羟脯氨酸含量及α-SMA表达增加,同时使Notch3表达下降,与空白对照组相比有统计学差异(P<0.05)。慢病毒转染CFs过表达Notch3后,与空白对照组相比,Notch3过表达组细胞上清羟脯氨酸含量及α-SMA表达均显著减少(P<0.05)。结论:过表达Notch3能抑制CFs向MFs转化。
- 黄玉霞姚茹邹倩范延红
- 关键词:心肌成纤维细胞NOTCH3过表达肌成纤维细胞
- Notch3表达下调在诱导心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞转化中的作用被引量:2
- 2014年
- 目的:探讨Notch3在心肌成纤维细胞(CFs)向肌成纤维细胞(MFs)转化中的作用。方法:用胶原酶消化法分离培养SD仔鼠的CFs,将其于不同浓度的转化生长因子-β1(TGF-β1)孵育24 h。用Western blot检测CFs中平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)及Notch3的表达量,用ELISA法检测细胞上清羟脯氨酸含量,用Real-Time PCR检测Notch3 mRNA表达量;利用RNAi法干扰CFs中Notch3的表达,用实时PCR及Western blot检测干扰效果;Western blot检测α-SMA蛋白表达量,ELISA检测各组细胞上清羟脯氨酸含量。结果:TGF-β1可浓度依赖性地诱导CFs细胞上清羟脯氨酸含量增加和α-SMA表达增加,同时使Notch3表达下降,其中2 ng/ml,5 ng/ml,10 ng/ml 3个浓度组与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。RNAi法干扰Notch3后,干扰组与对照组相比,Notch3 mRNA及蛋白表达均下降(P<0.05),同时,干扰组细胞上清羟脯氨酸含量及α-SMA表达均增加(P<0.05)。结论:Notch3表达下调能诱导CFs向MFs转化。
- 邹倩张东伟杜朝升何薇李聪叶范延红王海昌
- 关键词:NOTCH3心肌成纤维细胞
- 脂联素通过AMPK调节HepG2细胞中支链氨基酸的代谢
- 2014年
- 目的:探讨脂联素(APN)对HepG2细胞支链氨基酸(BCAA)分解代谢的影响及其作用机制。方法:将培养的HepG2细胞系随机分为对照组、APN组、APN+腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂(Compound C,CpC)组(APN+CpC)组和AMPK激动剂(AICAR)组。用Western blot检测AMPK、P-AMPK、BCKD E1α(BCAA分解代谢过程中的关键酶,磷酸化时为失活状态)及P-BCKD E1α蛋白的表达,用ELISA方法检测培养HepG2细胞上清中BCAA的含量。结果:与对照组相比,APN组和AICAR组均可以显著上调细胞P-AMPK的水平(P<0.05,P<0.01),显著降低细胞p-BCKD E1α及上清中BCAA的水平(P<0.05,P<0.01)。与APN组比较,APN+CpC组,其细胞内PAMPK水平显著下降(P<0.01),P-BCKD E1α及上清中BCAA的水平明显上升(分别为P<0.05及P<0.01)。结论:APN可显著促进HepG2细胞BCAA的分解代谢,其作用机制与AMPK磷酸化作用的上调相关。
- 杜朝升朱迪邹倩廉坤洪志博周芬陶凌
- 关键词:脂联素AMPKHEPG2细胞系支链氨基酸代谢
- 下调NAD(P)H氧化酶4加重缺氧复氧心肌细胞损伤:线粒体SIRT3信号的关键作用被引量:7
- 2014年
- 目的:明确内源性NAD(P)H氧化酶4(Nox4)在心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤中的作用并探讨其可能的机制。方法:以H9C2心肌细胞系为研究对象,建立H/R模型,将细胞分为对照组、NC-siRNA组、Nox4-siRNA组、H/R组、H/R+NC-siRNA组和H/R+Nox4-siRNA组。采用RNAi方法下调Nox4的表达,MTT比色法测定相对存活率、荧光素酶化学发光法测量ATP水平,MitoSOX荧光探针检测线粒体ROS,比色法测定NAD+/NADH的比值,Western blot法测定Nox4和SIRT3表达水平。结果:与对照组相比,H/R组H9C2心肌细胞中Nox4蛋白的水平明显增加(P<0.05),相对存活率、ATP的水平明显降低(P<0.05,P<0.01),而线粒体ROS生成明显增加(P<0.01),同时NAD+/NADH的比值明显增加、SIRT3表达量明显降低(P<0.05,P<0.01)。与H/R组相比,H/R+Nox4-siRNA组Nox4蛋白水平显著降低(P<0.05),相对存活率、ATP的水平进一步降低、线粒体ROS生成进一步增加(P<0.05),同时,NAD+/NADH的比值明显降低(P<0.01)、SIRT3蛋白水平进一步降低(P<0.05)。结论:下调Nox4可加重H/R诱导的心肌细胞损伤和氧化应激,抑制线粒体能量生成,其心肌细胞保护机制可能是通过上调NAD+/NADH的比值,增加SIRT3的表达而发挥作用。
- 何薇曾超邹倩马美娟李聪叶喻秋珺王海昌
- 关键词:NAD(P)H氧化酶心肌细胞缺氧复氧损伤线粒体