任晓丽
- 作品数：5 被引量：18H指数：1
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：陕西省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- KLF4 siRNA慢病毒载体构建和鉴定
- 2016年
- 目的:构建上皮锌指蛋白4(Krüppel-like factor 4,KLF4)siRNA慢病毒载体并进行初步鉴定,为研究KLF4在宫颈细胞癌中的分子机制奠定基础。方法:利用公用网站中提供的RNA干扰序列设计原则,设计4个RNA干扰靶点序列,合成含干扰序列的单链DNA oligo,然后退火配对产生双链,再通过其两端所含酶切位点直接连入酶切后的RNAi慢病毒载体上;将连接产物转入制备好的细菌感受态细胞,PCR鉴定阳性重组子后,送测序验证,测序结果经比对确认正确的克隆,制备编码慢病毒颗粒的重组病毒质粒及其两种辅助包装原件载体质粒,共转染293T细胞,收集富含慢病毒颗粒上清液,对其浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液,在293T细胞中测定并标定病毒滴度。收集上清液感染宫颈癌He La细胞,通过q RT-PCR及Western Blot鉴定KLF4 siRNA慢病毒干扰效果。结果:成功构建KLF4 siRNA慢病毒载体。KLF4 siRNA慢病毒感染He La细胞后,q RT-PCR及Western Blot测定结果显示,KLF4表达明显降低。结论:KLF4 siRNA慢病毒载体构建及包装成功,可有效抑制KLF4表达,为研究KLF4生物学功能奠定基础。
- 刘海霞魏莉任晓丽宋晖陈必良
- 关键词：慢病毒载体SI宫颈癌
- p53、p16、PTEN、Ki-67、p63在子宫内膜腺癌中的表达及其与预后的相关性被引量：17
- 2016年
- 目的探讨p53、p16、PTEN、Ki-67、p63在子宫内膜腺癌组织中的表达及其与临床预后的相关性,并分析这些基因在腺癌中表达间的相关性。方法采用免疫组化S-P法检测2001年1月至2015年11月西京医院收治的782例子宫内膜腺癌患者的癌组织石蜡标本中p53、p16、PTEN、Ki-67、p63的蛋白表达情况。结果 1p53、p16、PTEN、Ki-67、p63在子宫内膜腺癌组织中的阳性表达率分别为61.9%,76.2%,10.9%,54.2%,19.6%;2p53与临床分期、组织分化、脉管瘤栓形成、死亡有关,均P<0.000;3p16与组织分化、脉管瘤栓形成、复发及死亡有关,P值分别为:0.003、0.023、0.000、0.000;4PTEN与组织分化、脉管瘤栓形成、死亡有关,P值分别为:0.000、0.000、0.007;5Ki-67与临床分期、肌层浸润、组织分化、复发及死亡有关,P值分别为:0.000、0.000、0.043、0.000;6p63与组织分化、脉管瘤栓形成、复发有关,P值分别为:0.000、0.000、0.042(均P<0.05);7p53与p16、Ki-67、p63的表达呈正相关,相关系数分别为0.087、0.103、0.128(均P<0.05);8p16与PTEN、Ki-67、p63的表达呈正相关,相关系数分别为0.079、0.071、0.245(均P<0.05);9PTEN与p63的表达呈正相关,相关系数为0.242(P<0.05)。结论 p53、p16、PTEN、Ki-67、P63基因在子宫内膜腺癌中的表达存在明显相关性,它们在子宫内膜癌的发生、进展及影响其预后中可能起协同促进作用,联合检测这些基因表达可能更确切地反应肿瘤进展的动态改变,对判断子宫内膜腺癌恶性程度及评估预后有一定的参考价值。
- 陈丽君任晓丽孙秀利王映梅徐婉妮陈良凤王建
- 关键词：P53P16PTENKI-67P63子宫内膜腺癌
- 转录因子KLF4与肿瘤EMT的分子机制研究进展
- 2016年
- 上皮间质转化(EMT)是一种在胚胎发育和损伤修复过程中的生理性改变,其是肿瘤发生和发展过程中的一种常见现象,但作用及机制尚不完全清楚。目前已经发现多个转录因子通过调控下游靶基因参与了EMT的发生过程,其中Krüppel样因子4(KLF4)能够活化上皮基因的表达,同时抑制间质基因的表达,在EMT发生过程中发挥着关键作用,可能是肿瘤治疗的新靶点。该文系统地总结了转录因子KLF4在肿瘤EMT发展过程中的作用及分子机制。
- 任晓丽陈丽君宋晖刘海霞陈必良
- 关键词：肿瘤上皮间质转化分子机制
- siRNA沉默KLF4表达促进HeLa细胞上皮间质化被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨Klf4表达水平对Hela细胞上皮间质转化的影响。方法:设计合成针对Klf4的siRNA和阴性对照siRNA,并转染至Hela细胞。用含10ng/ml TGF-β1和10%胎牛血清的DMEM培养液诱导Hela细胞发生上皮间质转化,对照组使用不含TGF-β1的培养液。倒置显微镜下观察记录细胞的形态学改变。Western blot法和细胞免疫荧光法检测Klf4、上皮标志分子E-cadherin、ZO-1及间质标志分子N-cadherin的表达变化。结果:在TGFβ1的诱导作用下,Hela细胞呈现出梭形、类成纤维细胞的形态,发生了上皮间质转化。Western blot和细胞免疫荧光检测结果显示,Hela细胞在TGFβ1诱导作用下,Klf4、上皮标志分子E-cadherin、ZO-1表达减少,间质标志分子N-cadherin表达增多。转染了si Klf4的Hela细胞经TGFβ1诱导后,与转染了阴性对照siRNA的细胞相比,上皮标志分子E-cadherin、ZO-1表达略有减少,而间质标志分子N-cadherin的表达则明显增多。结论:抑制Klf4表达可以促进Hela细胞的上皮间质转化。
- 任晓丽宋晖刘海霞魏莉陈必良
- 关键词：上皮间质转化HELA细胞转化生长因子Β1
- siRNA沉默KLF4表达促进HeLa细胞迁移与增殖
- 2017年
- 目的:研究Krüppel样因子4(KLF4)的表达下调对HeLa细胞迁移与增殖的影响。方法:设计合成针对KLF4的si RNA和阴性对照si RNA,并转染至HeLa细胞中。使用含有10 ng/m L TGF-β1和10%胎牛血清的DMEM培养液诱导HeLa细胞发生上皮间质转化,对照组使用不含TGF-β1的培养液。通过Transwell迁移实验和划痕实验观察HeLa细胞迁移变化;通过细胞增殖实验和流式细胞术观察HeLa细胞增殖状况和细胞周期分布。结果:转染了si RNA的HeLa细胞经TGF-β1诱导后,其细胞迁移能力较其他各组显著提高;与转染了阴性对照si RNA和空白对照的细胞相比,转染si RNA的HeLa细胞增殖能力明显提高;TGF-β1可以使HeLa细胞周期发生G1期阻滞,但是采用si RNA干扰KLF4的表达对此过程无明显影响。结论:使用si RNA下调KLF4的表达可以促进HeLa细胞的迁移与增殖。
- 宋晖任晓丽刘海霞魏莉陈必良
- 关键词：HELA细胞增殖转化生长因子-Β1
