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樱桃病毒A北京分离物外壳蛋白的原核表达及抗血清制备被引量：8: 2010年; 根据前期研究获得的樱桃病毒A北京分离物(Cherry virus Aisolate Beijing,CVA-BJ)外壳蛋白基因序列设计引物,将此基因克隆到原核表达载体pET-28a后转化大肠杆菌BL21(DE3),以终浓度为1 mmol/L的IPTG进行诱导表达。Ni珠吸附法纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。间接ELISA测得抗血清效价为1∶2048。以纯化后的蛋白和樱桃叶片总蛋白为检测材料,Western blot分析表明抗血清具有高度特异性。间接ELISA方法检测樱桃病叶,结果呈阳性,与RT-PCR检测结果一致。表明制备的抗血清可用于感病樱桃样品中CVA的检测。; 郭颂张福兴怀晓周颖张瑞范在丰周涛; 关键词：间接ELISA 脱毒苗

番茄幼苗黄化曲叶病毒带毒率检测: 2010年; 2009年番茄黄化曲叶病毒病在北京市首次发生,且给生产造成严重损失,为了解番茄苗期带毒率以便进行综合防控,2010年2～3月在顺义区、大兴区、通州区、平谷区番茄育苗温室采集即将定植及已定植1～2d的番茄幼苗植株进行黄化曲叶病毒分子检测。共检测番茄幼苗样品645株,检出阳性样品226个,番茄幼苗带毒率为35.04%。检测结果表明,被侵染的番茄幼苗不表现明显症状,病毒含量明显低于表现典型症状的成株番茄。根据检测结果,初步预测2010年北京市早春温室番茄黄化曲叶病毒病有可能较大程度发生。; 师迎春李子龙王艳辉李荣华许小荣崔文清陈善义张瑞姚丹丹郑建秋周涛; 关键词：番茄黄化曲叶病毒病幼苗带毒率

苹果茎沟病毒外壳蛋白基因的克隆、原核表达及抗血清制备被引量：9: 2010年; 利用原核系统表达病毒编码的结构蛋白为抗原制备多克隆抗体是提高检测灵敏度和降低检测成本的重要途径。根据已报道的苹果茎沟病毒Apple stem grooving virus（ASGV）外壳蛋白（coatprotein,CP）基因的核苷酸序列设计合成引物,利用RT-PCR方法克隆了ASGV的cp基因（命名为ASGV cp BJ）,该基因由714个核苷酸组成,与GenBank中已报道的ASGV的cp基因核苷酸相似性为86%~96%。将ASGV的cp基因克隆到原核表达载体pET-28a上,转化大肠杆菌BL21（DE3）,筛选得到阳性克隆pET-ASGVcp。SDS-PAGE电泳分析发现,经IPTG诱导,ASGVcp在大肠杆菌中得到高效表达,获得的融合蛋白的分子量约为33kD。利用Ni珠吸附法纯化原核表达的目的蛋白,并以此蛋白为抗原制备了抗血清,ACP-ELISA检测结果显示,此抗血清效价为1∶4 096。Western blot分析结果显示,该抗血清具有高度特异性,能够用于ASGV的快速检测。; 怀晓周颖张瑞范在丰周涛; 关键词：潜隐病毒 WESTERN BLOT

北京地区地黄花叶病病原的分子鉴定被引量：16: 2010年; 为明确北京地区发生的地黄花叶病的病原,在进行生物学接种分离纯化的基础上利用RT-PCR方法对其进行了分子鉴定。通过接种指示植物和进行单斑分离,获得了病毒的纯分离物。经RT-PCR和序列测定及分析,有明显花叶症状的北京地黄样品受黄瓜花叶病毒Cucumber mosaic virus（CMV）和蚕豆萎蔫病毒2Broad bean wilt virus2（BBWV2）复合侵染。为进一步明确BBWV2地黄分离物（BBWV2-Rg）的分类地位,克隆了BBWV2-Rg RNA2多聚蛋白基因,并进行了序列测定和分析,结果表明该多聚蛋白基因由3 195个核苷酸组成,编码1 064个氨基酸。经序列比对分析,BBWV2-Rg编码的外壳蛋白大亚基LCP基因和小亚基SCP基因核苷酸序列与已发表的BBWV2其它株系相应基因核苷酸序列的同源性分别为78.69%~89.30%和76.99%~90.52%,氨基酸序列同源性分别为91.29%~97.51%和87.82%~96.45%。; 周颖张瑞郭颂怀晓范在丰周涛; 关键词：黄瓜花叶病毒系统进化树

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张瑞