潘全
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- ANKRD17蛋白抗体的制备、纯化及检测被引量：2
- 2007年
- 目的:制备ANKRD17(P260)蛋白的兔多克隆抗体,以与抗原相结合的方法进行抗体的纯化,并利用纯化的抗体对该蛋白进行细胞内免疫荧光检测。方法:构建表达GST-ANKRD17C端融合蛋白的质粒,在大肠杆菌中诱导表达;制备GST-ANKRD17C端抗原融合蛋白后免疫家兔,对获得的兔多克隆抗血清进行亲和纯化;纯化后的抗体经过Westernblot鉴定,用于细胞免疫荧光染色检测。结果:获得较高效价的血清抗体,并对血清抗体进行了纯化;利用纯化的抗体对ANKRD17蛋白进行了细胞内免疫荧光检测,发现改蛋白定位于细胞质中。结论:制备得到的纯化抗体为研究ANKRD17蛋白的功能打下了必要的基础。
- 舒伟李发慧邓敏潘全马清钧叶昕
- 关键词：免疫荧光
- 人Cyclin E原核表达载体的构建及表达被引量：2
- 2007年
- 目的:构建人CyclinE基因原核表达载体,并在E.coliBL21中表达并纯化。方法:PCR扩增人CyclinE基因片段,并将其克隆到原核表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-CyclinE。经限制性内切酶EcoRI与XhoI双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coliBL21,经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白。结果:获得全长约为1200bp的人的CyclinE基因片段。以构建的重组质粒pET32a(+)-CyclinE转化E.coliBL21后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约60000的融合蛋白。经SDS-PAGE、Westernblot分析显示,诱导表达的蛋白为CyclinE。结论:成功地构建了表达载体pET32a(+)-CyclinE,并表达出重组蛋白His-CyclinE,为进一步筛选在体内外能与CyclinE和CDK2结合的新蛋白奠定了基础。
- 李珊潘全李云龙叶昕
- 关键词：CYCLIN基因克隆原核表达
