王薇伊
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：四川师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省教育厅重点项目四川省教育厅资助科研项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 表达KstD重组大肠杆菌转化甾体化合物的条件优化被引量：1
- 2017年
- 3-甾酮-Δ1脱氢酶是胆固醇降解的关键酶之一,能脱去甾酮C1,2位上的氢原子,形成双键,在甾体药物的合成过程中具有重要的作用.以异源表达3-甾酮-Δ1脱氢酶的重组大肠杆菌为材料,对其培养条件以及黄体酮转化条件进行了优化,实现了甾体化合物的高效转化.首先,对表达3-甾酮-Δ1脱氢酶基因的重组大肠杆菌的培养条件对黄体酮脱氢的影响进行了研究,结果表明,IPTG浓度为0.05mmol/L,在28℃,pH值为7的条件下诱导培养5h,获得最高转化活性的细胞;其次,以优化条件下获得的菌体为催化剂,研究了各种转化条件对底物转化的影响,结果表明,以甲基-β-环糊精为助溶剂,转化温度为37℃,底物质量浓度为6g/L,菌体量为100g/L,pH为7.0,黄体酮的转化率达到99%以上,比优化前的产量提高了2倍,转化率提高近1倍.
- 任尧牛杨王薇伊葛方兰李江杨欣李维陈贵英
- 关键词：重组大肠杆菌黄体酮
- 耻垢分枝杆菌烯酰辅酶A水合酶编码基因表达分析及其敲除质粒的构建被引量：2
- 2015年
- 胆固醇是某些病原菌胞内生存所必需的碳源和能源物质,而胆固醇的各种代谢酶是潜在的药物作用靶点.烯酰辅酶A水合酶主要参与了脂肪酸的β-氧化循环,但其在胆固醇降解中的作用机理尚不完全清楚.首先对耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis MC2155)进行了全基因组搜索,获得了18个烯酰辅酶A水合酶的候选基因.对在不同甾醇类化合物条件下的转录组测序结果进行了分析,发现18个候选基因差异表达明显,其中位于胆固醇降解基因簇中的MSMEG_5915(ech A19),在胆固醇条件下表达明显上调,MSMEG_5915(ech A19)可能参与了胆固醇的侧链降解.最后,构建了MSMEG_5915的敲除质粒,并对耻垢分枝杆菌进行了基因转化.经PCR快速分子鉴定,MSMEG_5915基因被同源整合于耻垢分枝杆菌染色体上.为进一步揭示MSMEG_5915(ech A19)基因的功能奠定了基础.
- 任尧程世君马彩虹王薇伊唐明李维葛方兰陈贵英
- 关键词：耻垢分枝杆菌转录分析电转化
