邱婷
- 作品数：1 被引量：12H指数：1
- 供职机构：浙江大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 快速构建多重sgRNA载体利用CRISPR/Cas9技术敲除拟南芥IAA2基因被引量：12
- 2016年
- IAA2(Indole Acetic Acid 2)是拟南芥Aux/IAA生长素响应基因大家族中的一员,目前还没有它的突变体的报道,阻碍了对其功能和作用机制的深入研究。在CRISPR/Cas9基因组编辑技术中,1个sgRNA只能靶向基因的1个位点,有时基因敲除的效率并不高。为了提高敲除效率,本文在Golden-Gate克隆技术的基础上,通过两轮PCR扩增,将每3个sgRNA串联到同1个入门载体中,再将入门载体与含Cas9表达框的目标载体LR反应,获得最终的表达载体。结果表明,设计的6个sgRNA有4个发挥了作用,产生了碱基插入突变和大片段缺失突变等多种可遗传的突变。与单个sgRNA相比,多重sgRNA的基因敲除效率高、种系突变多;与其他构建多重sgRNA载体的方法相比,本方法具有快速、高效等优点。本文所得到的5个突变体为后续的IAA2功能研究提供了良好的材料。
- 刘丁源邱婷丁晓辉李苗苗朱睦元王君晖
