郭志刚
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：吉林大学中日联谊医院更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 具有自激活切割活性肠激酶轻链基因设计、表达及活性研究被引量：2
- 2011年
- 目的获得Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列+牛EKL的cDNA序列,实现EKL基因在大肠杆菌中的融合表达和自切割。方法用Trizol法从牛十二指肠组织中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增其cDNA片段,将此片段克隆于表达载体pGEX-2T,并在其前引入肠激酶(EK)识别序列。结果所表达蛋白经SDS-PAGE分析,相对分子质量约为61 000,经GST-Sepharose亲和色谱柱纯化后得到单一蛋白,SDS-PAGE显示单一条带,用微量EK引发自切割,切断GST标签蛋白和Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列,采用对氨基苯甲脒-Sepharose亲和色谱获得了轻链EK的单体。结论成功地克隆、表达了牛EK轻链基因,采用自激活、切割获得了EK单体,每1 L培养基获得EK5 mg,为进一步进行重组牛EK活性的研究及应用奠定了基础。
- 朱文赫郭志刚刘红建郭祥瑞孙德军
- 关键词：肠激酶大肠杆菌表达系统谷胱甘肽转移酶自激活
