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类芽孢杆菌环果寡糖糖基转移酶的分离纯化和酶学性质被引量：1: 2019年; 采用硫铵沉淀、疏水层析和DEAE离子交换层析对产自类芽孢杆菌Paenibacillus sp.Lfos16的环果寡糖糖基转移酶(Cycloinulooligosaccharide Fructanotransferase,CFTase)进行分离纯化,得到电泳纯的CFTase,最终纯化倍数为13. 9,比活力为33. 3 U/mg。纯化的CFTase经SDSPAGE和Native-PAGE电泳分析得出其相对分子量大小约为120 000,且是双亚基蛋白。探究了CFTase的酶学性质,最适反应条件为:40℃～45℃,p H 7. 0;温度稳定范围为30℃～45℃,p H稳定范围为5. 0～9. 0。并对CFTase降解菊糖的催化机制进行了分析,初步确定为外切加环化作用形成环果寡糖。; 马俊刘思敏唐文竹; 关键词：菊糖分离纯化

非融合海参溶菌酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶活鉴定被引量：2: 2018年; 利用实验室已构建好的表达载体pET32a(+)-SjLys,在基因工程菌RoSetta(DE3)plysS中表达重组融合海参溶菌酶rSjLys。利用融合的组氨酸标签,通过Ni 2+-NTA层析柱分离、纯化,获得高纯度的重组海参溶菌酶。利用重组牛肠激酶在22℃、pH 7.4、16h条件下对目的蛋白rSjLys的融合标签Trx-His-S tag进行完全酶切,通过Ni 2+-NTA层析柱纯化得到纯度大于99%的非融合的海参溶菌酶SjLys。实验结果表明,作为i型溶菌酶,与rSjLys比较,非融合海参溶菌酶对指示菌溶壁微球菌具有明显的抑菌作用。; 张齐牛庆昌姜琳黄君马俊丛丽娜李成; 关键词：重组蛋白抑菌活性

海参溶菌酶C端多肽的异构肽酶活性: 2016年; 海参溶菌酶C端多肽与5种异构肽酶的氨基酸残基序列比对发现,其具有较高同源性,维持异构肽酶活性的两个关键位点组氨酸(His)和丝氨酸(Ser)也高度保守。水解底物L-γ-Glu-pNA生成4-硝基苯胺的实验结果表明,C端多肽具有异构肽酶活性。丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF能有效破坏蛋白酶活性,表明Ser是异构肽酶rSjLys-C的关键活性位点,即rSjLys-C属于丝氨酸蛋白酶。确定最适催化条件为37℃、pH 7.4、NaCl 50 mmol/L。rSjLys-C的酶促反应动力学参数Vmax为1.446×10^(-5) mmol/(L·s),K_m为0.395 7mmol/L,k_(cat)为1.509×10-3 s^(-1),k_(cat)/K_m为23.813L/(mol·s)。; 牛庆昌李成梁雯婧马俊随瑞瑞张洋丛丽娜; 关键词：海参溶菌酶活性位点

海参i-型溶菌酶在毕赤酵母基因工程菌中优化表达及纯化被引量：1: 2016年; 将实验室已构建的毕赤酵母基因工程菌(p PIC9K-Sj Lys/GS115)作为海参i-型溶菌酶生产菌株,本研究分别从甲醇浓度、培养基p H、温度和诱导时间对其产酶发酵条件进行优化。实验得出甲醇诱导浓度为1.0%,发酵培养基初始p H 6.0,温度30℃,培养96 h为最佳目的蛋白表达条件,其发酵液中海参i-型溶菌酶含量达10.63 mg/L。将发酵液经离心和超滤浓缩后得到上清液,再经离子交换和凝胶过滤层析纯化获得海参i-型溶菌酶产品,其酶活力达826.44 U/mg。经测定该酶对革兰氏阳性菌溶壁微球菌和革兰氏阴性菌副溶血弧菌均具有明显的抑菌作用。; 马俊张洋丛丽娜李成; 关键词：毕赤酵母发酵条件优化酶活性

菊粉外切酶的异源表达、纯化及酶学性质被引量：4: 2019年; 将菊粉降解菌Paenibacillus sp. Lfos16的菊粉外切酶基因克隆至表达载体p ET-28a (+),转入Escherichia. coli BL21(DE3)中实现了异源表达。利用镍柱亲和层析纯化重组菊粉外切酶,并进行SDS-PAGE检测。重组菊粉外切酶的表观分子质量为87 k Da,经纯化后,重组菊粉外切酶的比酶活为348.30 U/mg。重组菊粉外切酶作用菊粉和蔗糖的酶活分别为259.37 U/m L和592.16 U/m L,I/S值为0.438,且重组酶水解菊粉的主要产物为果糖。重组菊粉外切酶最适作用温度为40℃,且当温度低于30℃时酶活较稳定;最适作用pH为6。Ag^+、Cu^(2+)、Mn^(2+)、Zn^(2+)、Hg^(2+)、Fe^(3+)具有显著抑制作用。重组菊粉外切酶对菊粉的K_m为19. 28 mg/m L,Vmax为0.18 mg/(min·m L)。; 马俊安启坤唐文竹; 关键词：类芽孢杆菌克隆酶学性质

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马俊