李青春
- 作品数：10 被引量：9H指数：2
- 供职机构：潍坊医学院更多>>
- 发文基金：山东省科技攻关计划国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- AFP启动子调控的IL-1β表达对肝癌细胞生物学行为的影响
- 目的建立能够在肿瘤细胞中特异性表达高水平促炎性细胞因子IL-1β的真核表达载体,转染小鼠肝癌细胞建立皮下荷瘤模型,研究IL-1β对肝癌发生发展的影响,从而为肝脏肿瘤免疫逃逸机理的研究提供实验依据。
- 李青春梁淑娟刘艳艳王焕芹肖伟玲张素华
- 文献传递
- 人caspase-1真核表达载体的构建及表达
- 2009年
- 目的构建人caspase-1真核表达载体,观察其在人肝癌细胞HepG2中的表达。方法分离人外周血淋巴细胞,LPS刺激提取细胞总RNA,RT-PCR方法分别扩增caspase-1两片段S_1、S_2,利用重叠延伸PCR方法(SOE)获得caspase-1全长序列,将其克隆入pIRES_2-EGFP载体,进行茵落PCR、限制性酶谱分析、DNA序列测定。通过jetPEI方法转染HepG2肝癌细胞,倒置相差荧光显微镜下观察其表达情况,RT-PCR分析caspase-1的表达水平。结果从外周淋巴细胞中经RT-PCR分别扩增出365bp和883bp片段,纯化后的PCR产物通过SOE扩增得到一1234bp的条带,与预期序列长度一致。SOE产物与pIRES_2-EGFP经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后连接,茵落PCR鉴定获得数个阳性克隆,质粒经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ限制性酶谱分析酶解出1234bp条带,DNA序列分析证实重组载体中的DNA序列与GeneBank中人caspase-1序列完全一致。将该载体转染至HepG2细胞中,经RT-PCR证实,与转染pIRES_2-EGFP空载体的对照组细胞相比,caspase-1水平明显升高。结论本研究成功构建人caspase-1表达载体pIRES_2-EGFP-caspase-1,该载体能够在人肝癌细胞中高效表达外源基因。
- 李青春张素华马晓君肖伟玲梁淑娟
- 关键词：肝肿瘤真核表达载体CASPASE-1
- IL-1β反义RNA肝癌特异性表达载体对肝癌恶性生物学行为的影响
- 目的:构建小鼠IL-1β反义RNA表达载体,探讨靶向阻断IL-1β后对肝癌细胞浸润与生长行为的影响及分子机制。方法:RT-PCR分别扩增小鼠IL-1β1(264bp)和IL-1β2(284bp)基因片段,首先经
- 刘艳艳梁淑娟肖伟玲王焕芹李青春张素华
- 文献传递
- pLIVE-mIL-1β在小鼠肝癌细胞中的稳定表达对
- 目的:利用可以在实验动物肝脏中达到高效、持续、特异性表达的载体系统pLIVE Vector,构建小鼠IL-1β真核表达载体pLIVE-mIL-1β,转染小鼠Hepa1-6肝癌细胞,观察目的基因的稳定表达及对细胞增殖和NK...
- 王焕芹梁淑娟肖伟玲刘艳艳李青春张素华
- 文献传递
- pLIVE-IL-1β表达载体的构建及在Hepa1-6细胞的表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建应用于体内表达和研究的小鼠IL-1β肝癌细胞特异性表达载体,观察其在小鼠HE-PA1-6细胞中的表达水平。方法分离BALB/c小鼠外周血淋巴细胞,LPS刺激后提到总RNA,RT-PCR扩增IL-1β基因,与pLIVETM连接构建pLIVE-IL-1β重组表达载体,并通过菌落PCR、限制性酶谱分析、DNA序列分析进行鉴定。利用TransITTM将pLIVE-IL-1β转染至Hepa1-6肝癌细胞,RT-PCR分析IL-1β的表达水平。结果从小鼠腹腔巨噬细胞中RT-PCR扩增得到一822bp的片段,纯化的PCR产物与pLIVETM同时经XhoⅠ和NheⅠ双酶切后连接,菌落PCR鉴定获得多个阳性克隆,经质粒XhoⅠ+NheⅠ限制性酶谱分析,酶解出822bp的条带,DNA序列分析证实重组载体中的DNA序列与GeneBank登录的小鼠IL-1β基因一致。将该载体转染Hepa1-6细胞,RT-PCR证实,与转染pLIVETM的对照细胞相比,IL-1β的表达水平明显升高。结论成功构建了小鼠IL-1β肝癌组织特异性表达载体pLIVE-IL-1β,该载体能够在小鼠肝癌细胞中稳定高效表达IL-1β。
- 王焕芹梁淑娟刘艳艳李青春肖伟玲李若葆
- 关键词：肝癌IL-1Β促炎性细胞因子
- IL-1β对NK细胞干扰素应答效率的调控作用及机制研究
- 目的:探讨促炎性因子IL-1β在肿瘤局部微环境中的表达,对NK细胞杀伤活性及其干扰素应答效率的影响和主要的分子机制。方法:构建人和小鼠的IL-1β真核表达载体和反义表达载体.将其转染人和小鼠肝癌
- 梁淑娟肖伟玲刘艳艳王焕芹李青春张素华
- 文献传递
- 利用增强型绿色荧光蛋白基因作筛选标记克隆载体的构建及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记的新型pUC18筛选载体。方法将EGFP基因克隆至pUC18载体的PstI/HindⅢ位点,构建筛选载体pUC18-EGFP,并验证pUC18-EGFP能否利用EG-FP的荧光特性筛选出含基因重组体的阳性克隆。结果经酶切和基因测序鉴定pUC18-EGFP载体构建正确;在外源基因插入该载体后,对LB氨苄平板上的绿色菌落进行酶切和基因测序鉴定,结果证明LB平板上的绿色菌落即为含有重组质粒的克隆。结论成功构建pUC18-EGFP筛选载体,利用EGFP的绿色荧光可筛选出阳性克隆。
- 唐金宝陈永梁淑娟王焕芹李青春
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白大肠杆菌阳性克隆
- AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组载体的构建及其在肝癌H22细胞中的表达被引量：3
- 2009年
- 目的:构建小鼠甲胎蛋白(AFP)启动子调控的小鼠IL-1β(mIL-1β)重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β,并检测其在真核细胞内的表达。方法:重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)获得含小鼠AFP最小启动子及巨细胞病毒(CMV)增强子区(ECMV)的嵌合基因,将其克隆至pIRES2-EGFP载体,构建肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP。RT-PCR扩增小鼠IL-1β基因,克隆至pafpIRES2-EGFP,进行酶谱分析及DNA序列测定。利用jetPEI法将其分别转染H22细胞和YAC-1细胞,倒置相差荧光显微镜下观察,RT-PCR分析mIL-1β表达水平的变化。结果:SOE-PCR方法获得长度为537bp的AFP和ECMV嵌合基因,克隆后经限制性酶切和DNA序列分析确认成功构建了小鼠肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP。PCR扩增小鼠IL-1β基因后将其克隆至pafpIRES2-EGFP,获得AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β,细胞转染分析证实,该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性高效表达,RT-PCR检测可见转染细胞中mIL-1β水平明显升高。结论:成功构建真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β,该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性表达IL-1β。
- 李青春梁淑娟王雪净刘艳艳王焕芹张素华
- 关键词：IL-1ΒAFP启动子组织特异性肝癌
- 小鼠IL-1β对肝癌细胞生物学行为的影响及逃逸机制研究
- 目的:构建小鼠促炎性因子IL-1β的真核表达载体,转染小鼠H22肝癌细胞,建立小鼠体内荷瘤模型,研究IL-1β主导的促炎性微环境对肝癌细胞生长、转移及NK细胞免疫活性的影响。
- 肖伟玲梁淑娟刘艳艳王焕芹李青春张素华
- 文献传递
- 人caspase-1基因在肝癌细胞中的表达及对IL-1β水平的影响被引量：4
- 2011年
- 目的:将人caspase-1基因真核表达载体转染肝癌细胞后观察其表达水平及对IL-1β水平的影响,为研究cas-pase-1与IL-1β的关系及其在慢性炎症与肿瘤中的作用提供依据。方法:利用阳离子聚合物(jetPEI)将pIRES2-EGFP-caspase-1重组表达载体和pIRES2-EGFP对照载体转染人肝癌细胞HepG2(HepG2/caspase-1、HepG2/mock),48小时后倒置相差荧光显微镜下观察表达情况,利用RT-PCR、Western blot方法检测两组细胞caspase-1表达水平,采用caspase-1底物显色分析研究的方法检测两组细胞中caspase-1的活性。夹心ELISA法检测细胞培养上清以及细胞裂解液中IL-1β的表达水平。结果:转染48小时后倒置相差显微镜下可见,pIRES2-EGFP-caspase-1和pIRES2-EGFP重组表达载体均能在HepG2细胞中高效表达;HepG2/caspase-1细胞中caspase-1 mRNA表达水平显著提高;经LPS刺激后,HepG2/caspase-1细胞中caspase-1总蛋白的水平明显升高;caspase-1的生物活性水平与对照组相比具有显著性差异(t=25.679,P<0.05);HepG2/caspase-1细胞培养上清中IL-1β的水平明显高于HepG2/mock组细胞(t=3.417,P<0.05),胞浆裂解液中的变化相对不显著(t=2.396,P>0.05)。结论:人caspase-1基因真核表达载体pIRES2-EGFP-caspase-1能够在肝癌细胞中高效表达caspase-1,且该重组表达载体在HepG2细胞中能提高活性IL-1β的表达。
- 林志娟肖伟玲王雪净李青春梁淑娟
- 关键词：CASPASE-1肝癌细胞IL-1Β炎症
