王玉娥
- 作品数：25 被引量：37H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省留学归国人员基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学金属学及工艺更多>>
- 先天淋巴细胞及其在病原感染中作用机制的研究进展被引量：1
- 2021年
- 动物在生命活动过程中会接触细菌、病毒以及寄生虫等病原微生物,绝大多数病原微生物可通过黏膜侵入感染机体。为了预防黏膜途径感染的发生,动物机体演化出一套防御系统—黏膜免疫系统。黏膜免疫系统是动物机体免疫网络中极其重要的组成部分,是机体抵抗病原微生物感染的第一道防线。它除了包含屏障结构如紧密排列的上皮细胞外,还包含效应细胞如先天淋巴细胞(Innate lym-phoid cells,ILCs)、M细胞(Membranous cell)和单核细胞等免疫细胞。ILCs主要存在于黏膜中,参与共生微生物的调控、淋巴细胞的发育、受损组织的修复及上皮屏障的保护作用。近年来,越来越多的研究发现在病原感染过程中,ILCs参与协调黏膜免疫抵抗病原微生物的感染。本文着重对ILCs协助机体拮抗几种不同类型病原微生物感染的功能进行综述,为进一步研究ILCs在病原感染中的作用提供参考。
- 马文杰冯亚文陈洪岩王玉娥
- 关键词：病原感染黏膜免疫系统第一道防线淋巴细胞M细胞效应细胞
- 兔源多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌多重PCR检测方法的建立
- 2023年
- 目的建立兔源多杀性巴氏杆菌(Pm)、金黄色葡萄球菌(Sa)和肺炎克雷伯菌(Kp)的多重PCR方法。方法本研究参考Pm kmt1基因、Sa nuc基因和Kp kh1基因的保守区域,设计3对特异性引物,以温度梯度PCR法确定最适退火温度(Tm),采用控制单一变量法优化引物浓度,构建kmt1、nuc和kh1基因的重组质粒标准品pMDPm、pMD-Sa和pMD-Kp,确定最小检测量;以兔源支气管败血波氏杆菌和产气荚膜梭菌等9种病原体核酸样本确定多重PCR法的特异性;通过批间和批内实验验证其重复性;经检测疑似感染的临床样本与已报道的检测方法进行比较,评估其临床应用效果。结果最适退火温度为54.5℃;扩增kmt1和nuc基因的引物最适浓度均为1μL(10μmol/L),扩增kh1基因的引物最适浓度为0.5μL(10μmol/L);pMD-Pm最低检测限为20.6 copies/μL,pMDSa最低检测限为18.2 copies/μL,pMD-Kp最低检测限为23.2 copies/μL,表明其灵敏性高;该方法仅对Pm、Sa和Kp有特异性扩增条带,对其他病原体均无扩增条带,表明特异性较强;批间和批内检测结果一致,表明重复性较好;经临床样本检测Pm、Sa和Kp单独的阳性率分别为62.92%、25.84%和49.43%,与已报道的检测方法结果一致。结论本研究成功建立了一种能够同时快速检测兔源多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的多重PCR方法。
- 张贺陶坤盛陈见兴王豪杰陈洪岩王玉娥夏长友
- 关键词：多杀性巴氏杆菌金黄色葡萄球菌肺炎克雷伯菌多重PCR
- PDCoV、SADS-CoV与SVA三重RT-PCR检测方法的建立与应用
- 2023年
- 【背景】猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)、新型猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV)与塞内卡病毒A型(seneca virus A,SVA)均为猪的新发病原,严重危害养猪业的发展。猪感染这3种新发病原难以根据临床症状诊断,因此亟须建立多重反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法对疑似患病猪进行快速诊断,以降低经济损失。【目的】建立能同时检测PDCoV、SADS-CoV和SVA单一或混合感染的三重RT-PCR检测方法。【方法】参考GenBank中登录的PDCoV和SADS-CoV N基因、SVA L/P1基因保守区域序列设计3对特异性引物,以温度梯度PCR法确定最适退火温度(Tm);采用方阵法优化其引物浓度;构建重组质粒PMD-PDCoV、PMD-SADS-CoV和PMD-SVA作为标准品确定最小检测量;以猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖和呼吸综合征病毒等6种常见感染猪的病毒核酸样本为模板,确定三重RT-PCR法的特异性;以批间和批内试验验证其重复性;经检测临床样本并与已报道的检测方法进行比较,评估其临床应用效果。【结果】建立的三重RT-PCR检测方法最佳退火温度为58.3℃,引物最佳浓度分别为0.50、0.25和0.25μmol/L;其敏感性高,PMD-PDCoV、PMD-SADS-CoV与PMD-SVA最低检测限分别为1、1和10 copies/μL;其特异性强,仅对PDCoV、SADS-CoV和SVA有特异性条带,对其他病毒均无扩增条带;该方法重复性好,批间和批内试验检测结果均一致。最后经临床样本检测PDCoV、SADS-CoV和SVA的阳性率分别为4.4%、0%和0.73%,与已报道的检测方法一致。【结论】建立了一种能够同时快速检测PDCoV、SADS-CoV和SVA的三重RT-PCR方法,为临床上检测上述3种病毒提供了技术支撑。
- 陈见兴王豪杰潘喻刘弘毅林欢朱良全陈洪岩谢金鑫夏长友张贺王玉娥
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒三型、猪流感病毒三重RT-PCR检测方法建立及初步应用被引量：4
- 2022年
- 【背景】猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪圆环病毒三型(porcine circovirus typeⅢ,PCV3)和猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)是3种影响猪只健康的重要呼吸道病原,对养猪业造成严重的经济损失,因此需要建立高效快速的检测方法,以了解3种病原在国内的流行情况。【目的】建立能同时检测PRRSV、PCV3和SIV的三重RT-PCR方法,为3种病毒的流行病学调查和疾病监控提供技术支持。【方法】针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),猪圆环病毒三型(PCV3),猪流感病毒(SIV)基因序列,分别设计3对特异性引物,扩增PRRSV M和N基因(436 bp)、PCV3 Cap基因(619 bp)和SIV M基因(199 bp)。通过对退火温度和引物浓度优化建立三重RT-PCR检测方法,并对建立的多重检测方法进行特异性、敏感性、重复性试验验证。【结果】建立了能够同时快速检测PRRSV、PCV3、SIV的三重RT-PCR方法,而对猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)、猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus typeⅡ,PCV2)、猪细小病毒2型(porcine parvovirusⅡ,PPV2)、猪细小病毒3型(porcine parvovirusⅢ,PPV3)和猪细环病毒1型(torque teno sus virus I,TTSuV1)等6种病原的扩增均为阴性,特异性较好。敏感性结果显示,同时检测PRRSV、PCV3、SIV这3种病原的检测下限为100copies/μL,批间与批内试验结果均一致。用该方法对黑龙江省部分地区猪场的67份临床病料进行检测,结果显示PRRSV阳性率为16.5%,PCV3阳性率为10.5%,SIV阳性率为10.5%,而且存在混合感染。【结论】该方法灵敏度高、特异性强,能够应用于临床样品检测,有效预测病原的流行情况。
- 王梦杰张文立王欣荣陈见兴夏长友陈洪岩张贺王玉娥
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪流感病毒
- PDCoV、SADS-CoV与SVA三重RT-PCR检测方法的建立与应用
- 2022年
- 【背景】猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)、新型猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV)与塞内卡病毒A型(Seneca virus A,SVA)均为猪的新发病原,严重危害养猪业的发展。猪感染这3种新发病原难以根据临床症状诊断,因此亟须建立多重RT-PCR检测方法对疑似患病猪进行快速诊断,以降低经济损失。【目的】建立能同时检测PDCoV、SADS-CoV和SVA单一或混合感染的三重RT-PCR检测方法。【方法】参考GenBank中登录的PDCoV和SADS-CoV N基因、SVA L/P1基因保守区域,设计3对特异性引物,以温度梯度PCR法确定最适退火温度(Tm);采用方阵法优化其引物浓度;构建重组质粒PMD-PDCoV、PMD-SADS-CoV和PMD-SVA作为标准品确定最小检测量(limits of detection,LOD);以猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等6种常见感染猪的病毒核酸样本为模板,确定三重RT-PCR法的特异性;以批间和批内实验验证其重复性;经检测疑似感染的临床样本并与已报道的检测方法进行比较,评估其临床应用效果。【结果】最佳退火温度为58.3℃;引物最佳浓度分别为0.5、0.25和0.25μmol/L;其敏感性高,PMD-PDCoV、PMD-SADS-CoV与PMD-SVA最低检测限分别为1、1和10 copies/μL;其特异性强,仅对PDCoV、SADS-CoV和SVA有特异性条带,对其他病毒均无扩增条带;该方法重复性好,批间和批内实验检测结果均一致。经临床样本检测PDCoV、SADS-CoV和SVA的阳性率分别为65.85%、30.49%和57.32%,与已报道的检测方法一致。最后从13份PDCoV、SADS-CoV和SVA均为阳性的样品中随机选取5份样品进行测序,并做同源性及进化树分析,结果显示5份阳性病料的PCR扩增序列之间相似性较高,而且和参考序列之间也具有较高的相似性,均可达到96%以上。表明本研究建立的方法在应用于临床样品检测中具有较高的准确性和可靠性。【结论】
- 陈见兴王豪杰潘喻刘弘毅林欢朱良全陈洪岩谢金鑫夏长友张贺王玉娥
- 农用实验动物猪感染模型的研究概况
- 王玉娥陈洪岩
- 实验用猪感染模型研究概况被引量：2
- 2019年
- 传统的生物医学模型动物在实验设施中易于管理,可快速高效地应用于人类疾病相关基因的基础研究,但在某些情况下,它们无法代表人类生理的复杂性。猪在解剖学和生理学上与人类相似度很高,在人类疾病的相关研究中的应用广泛。本综述回顾了猪作为人类传染性疾病及自身传染病模型的应用概况,并概述了疫病感染模型的表征及特性。
- 王玉娥张贺陈洪岩
- 关键词：实验动物
- 白细胞ADAM17在急性炎症中的调节作用及机制研究
- ADAM 17为金属蛋白酶家族的重要成员之一,为Ⅰ型跨膜蛋白,在组织中广泛表达,因能水解膜结合型TNFα前体释放可溶性TNFα,又被称作肿瘤坏死因子α前体转换酶(tumor necrosis factor α conve...
- 王玉娥
- 关键词：动物免疫学急性炎症白细胞金属蛋白酶
- 文献传递
- 血红蛋白β亚基对猪流行性腹泻病毒增殖抑制作用的研究被引量：1
- 2016年
- 本实验室前期蛋白质组学研究结果显示,猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染非洲绿猴肾细胞(Vero-E6)后,导致血红蛋白β亚基(HBB)的表达量升高。为进一步从蛋白水平验证前期的实验结果并研究HBB对PEDV增殖作用的影响,本研究将PEDV感染Vero-E6细胞,感染24 h后经western blot检测结果表明,PEDV感染能够促进HBB的表达。进一步采用RT-PCR从Vero-E6细胞总RNA中扩增HBB基因并将其克隆至真核表达载体pCAGGS中,构建HBB真核表达重组质粒pCAGGS-HBB,并将其转染至Vero-E6细胞。经western blot检测结果表明,HBB在Vero-E6细胞中获得高效表达。在HBB过表达后感染PEDV,经western blot、TCID_(50)及荧光定量PCR检测结果表明,过表达HBB能够显著抑制PEDV的增殖。本研究对于进一步阐明HBB对PEDV增殖作用的影响机制提供了实验依据。
- 徐云飞郭龙军张健时洪艳冯力任慧英王玉娥
- 关键词：猪流行性腹泻病毒病毒增殖
- 适配体对霉菌毒素致小鼠肠道菌群失调的缓解作用
- 目的：探索已筛选获得的适配体对玉米赤霉烯酮(ZEN)引起的小鼠肠道菌群失调的缓解作用.方法：采用体重19.43±1.8gSPF雌性BABL/c小鼠12只,随机分为三组,于腹腔左侧注射ZEN甲醇溶剂对照组(甲醇浓度0.5 ...
- 张圆圆王玉娥张贺赵丽丽陈洪岩
- 关键词：适配体玉米赤霉烯酮粪便菌群
