王莉莉
- 作品数：3 被引量：13H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 基于鸡毒支原体热休克蛋白DnaK的间接ELISA方法的评价及初步应用被引量：4
- 2018年
- 为研究鸡毒支原体(MG)重组热休克蛋白DnaK (rDnaK)的免疫反应原性及其作为ELISA方法中诊断抗原的应用价值,本研究将已构建的含有MG DnaK基因的重组质粒p ET-30a-DnaK进行原核表达纯化,以多份MG的标准阳性血清和阴性血清作为一抗,进行western blot分析,结果显示r DnaK与MG的阳性血清发生特异性反应,与MG的阴性血清无反应条带,表明r DnaK具有较好的免疫反应原性。将其作为包被抗原包被酶标板,用HRP标记的兔抗鸡Ig G作为酶标二抗,分别对抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度及工作时间等反应条件进行了优化,建立了一种稳定检测MG抗体的间接ELISA方法。对该方法进行评估,灵敏性试验结果显示该方法与进口试剂盒相当;特异性试验结果显示包被抗原r DnaK不与NDV、IBV、ILTV等几种常见的禽呼吸道疾病的阳性血清发生交叉反应;重复性试验结果显示,批内变异系数为1.6%～5.15%,批间变异系数为2.9%～5.98%;符合率试验结果显示该方法与进口试剂盒的总体符合率为90.4%;抗体持续期试验结果显示该方法最早能在鸡群免疫MG疫苗后一周检测到MG抗体,表明该诊断方法适用于MG感染的早期检测。采用该方法检测了来自全国5个省份的568份临床样品,其结果显示MG的感染率在23%～51%,对我国MG的流行状况做了初步的调查。
- 王莉莉于艳超周长平赵雅芝潘巧张琳郝文君王秀梅辛九庆
- 关键词：鸡毒支原体DNAK免疫原性间接ELISA
- 牛支原体脂质相关膜蛋白诱导胎牛肺细胞差异表达的转录组学研究被引量：3
- 2017年
- 为阐明牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞的免疫应答机制,本研究采用转录组测序(RNA-seq)技术结合生物信息学方法分析M.bovis LAMPs诱导EBL细胞产生的差异表达基因。本实验首先分别构建LAMPs诱导组与对照组EBL细胞的c DNA文库并对其进行高通量测序,利用MAS3.0软件对差异表达基因进行筛选,结果显示共筛选得到706个差异表达基因,其中上调和下调差异基因分别为364个和342个;GO注释显示,差异表达基因编码蛋白主要与细胞黏附、免疫应答以及细胞增殖等相关;利用荧光定量PCR对部分差异表达基因(PIM2、F2RL1以及PTPN2)的表达情况进行验证,结果与RNA-seq测序结果相符。本研究为进一步阐述M.bovis的致病机制及宿主的免疫应答机制提供依据。
- 王显兵汪洋李媛邵家日王琪陈莹周长平于艳超王莉莉辛九庆马红霞
- 关键词：转录组测序
- 鸡毒支原体热休克蛋白GrpE粘附特性的鉴定被引量：6
- 2017年
- 鸡毒支原体(MG)脂质相关蛋白(LAMPs)的粘附特性在感染宿主细胞中起重要的作用,本实验室前期利用快速蛋白液相色谱和质谱鉴定MG的grp E基因编码的GrpE蛋白为热休克蛋白。为进一步鉴定GrpE蛋白是否具有粘附特性,本研究通过原核表达MG株grp E基因,并利用表达纯化的重组蛋白GrpE(rGrpE)免疫BALB/c小鼠。制备抗GrpE的单克隆抗体(MAb)。通过亚细胞定位,结果显示GrpE定位于细胞表面。通过激光共聚焦显微镜观察到rGrpE对DF-1细胞具有明显的粘附作用,而且利用抗GrpE的MAb能够特异抑制MG膜蛋白对DF-1细胞的粘附。此外,夹心ELISA和流式细胞术试验结果也表明制备的MAb能够显著抑制MG膜蛋白对DF-1细胞的粘附,并呈剂量依赖关系。上述结果表明热休克蛋白GrpE是MG的一种新的具有粘附特性的蛋白。
- 周长平陈莹李媛高利萍王显兵王莉莉于艳超辛九庆
- 关键词：鸡毒支原体粘附
