贺天柱
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- MiR-27靶基因的分析及鉴定被引量：2
- 2010年
- MicroRNAs(miRNAs)是一类约20～25nt的小分子核苷酸,在细胞内的多种生物学过程,如细胞增殖、凋亡、生长、分化和代谢等过程中具有重要的功能。已知miR-27在脂肪细胞和肌肉细胞的发育过程中起了重要作用,其在神经细胞中的表达调节至今仍不清楚。在本研究中,通过miRBase和TargetScan数据库分析了miR-27的靶基因,构建了miR-27的真核表达载体,改造了萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶报告载体,将miR-27的靶基因Bmi1的3′-UTR融合到报告载体中,转染神经胶质瘤细胞,利用双荧光素酶检测系统分析荧光素酶的活性。研究发现miR-27a和miR-27b共同的靶基因主要调节发育过程。MiR-27真核表达载体能产生成熟态的miR-27。MiR-27a、miR-27b或miR-27a和miR-27b联合与Bmi1的3′-UTR的正义序列共转染U343细胞能明显降低萤火虫荧光素酶的活性(分别P<0.05,P<0.05,P<0.01),这提示了Bmi1可能为miR-27的靶基因。
- 夏红飞贺天柱宋培培崔熠马旭
- 关键词：真核表达载体
- miR-128真核表达载体的构建及功能的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的构建miR-128真核表达载体,研究其在神经胶质瘤细胞株U343表达及对U343细胞增殖的影响。方法以人神经胶质瘤细胞株U343的DNA为模板扩增miR-128-1和miR-128-2的前体序列,将人miR-128-1(hsamiR128-1)和人miR-128-2(hsa-miR128-2)基因克隆到真核表达载体pCR3.1,将pCR3.1-miR-128-1(p-128-1)和pCR3.1-miR-128-2(p-128-2)表达载体瞬时转染U343细胞,采用Northern印迹检测成熟的miR-128表达。将U343细胞接种96孔板,MTT法检测过表达miR-128对细胞增殖的影响。结果p-128-1和p-128-2表达载体经酶切及测序鉴定正确;二者转染细胞后,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增结果显示,其能有效表达miR-128的前体;Northern印迹结果均能产生成熟态的miR-128。MTT检测结果在无血清培养和维甲酸处理的情况下,细胞的增殖能力明显下降。结论成功构建了p-128-1和p-128-2的真核表达载体,转染神经胶质瘤细胞后能有效表达,miR-128基因过表达能抑制U343细胞的增殖。
- 夏红飞贺天柱崔熠马旭
- 关键词：真核表达载体细胞增殖基因表达
