张蕾
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：昆明医科大学附属甘美医院（昆明市第一人民医院）更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 睡美人转座子介导AEG1基因修饰的树突状细胞可治疗小鼠肝癌被引量：1
- 2016年
- 目的 :探讨睡美人(Sleeping Bbeauty,SB)转座子系统转染树突状细胞(dendritic cells,DCs)的效率,以及星形胶质细胞上调基因1(astrocyte elevated gene 1,AEG 1)重组转座子系统转染DCs对小鼠肝癌的抑制作用。方法 :从p EGFP-N1质粒中获取巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fl uorescent protein,EGFP)基因,从小鼠肝癌细胞H22中克隆AEG1基因,将上述基因分别插入质粒p T/HB后获得重组转座子载体p T-CMV-EGFP和p T-CMV-AEG1。将重组转座子载体分别与转座酶p CMV-SB11按一定比例混合后获得双质粒转座子系统p T-CMV-EGFP/SB11和p T-CMV-AEG1/SB11。将p T-CMVEGFP/SB11转染DCs,荧光显微镜和FCM法观察EGFP表达率;将p T-CMV-AEG1/SB11转染DCs后,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测AEG1 m RNA和蛋白的表达。用p T-CMV-AEG1/SB11转染后的DCs治疗肝癌H22细胞荷瘤小鼠,观察小鼠体内肿瘤体积的变化,并采用乳酸脱氢酶释放法检测治疗19 d后小鼠脾细胞对肝癌H22细胞的杀伤活性。结果 :经质粒酶切和基因测序证实,重组转座子载体p T-CMV-EGFP和pT-CMV-AEG1均构建成功。pT-CMV-EGFP/SB11转染DCs后24和48 h,细胞内EGFP的表达率分别为46.5%和27.8%,均明显高于空载体p TCMV/SB11转染组(P值均<0.001)。p T-CMV-AEG1/SB11转染DCs后24 h,细胞内AEG1 m RNA和蛋白表达水平均高于空载体p T-CMV/SB11转染组(P值均<0.001)。用p T-CMV-AEG1/SB11转染的DCs治疗H22荷瘤小鼠后,小鼠体内肿瘤生长被明显抑制(P<0.01),小鼠脾细胞对肝癌H22细胞的杀伤活性明显增强(P<0.01)。结论:SB转座子系统可高效转染DCs。p T-CMV-AEG1/SB11转染的DCs可通过诱导特异性细胞免疫,抑制H22细胞荷瘤小鼠的肿瘤生长。
- 杨柳王翼寅陈睿吕莎尹燕锋李源张蕾苏晓三
- 关键词：树突细胞
- 两种外周血单个核细胞采集方法体外诱导CIK细胞的比较
- 2013年
- 目的比较两种外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)采集方法诱导的细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)扩增效率、细胞表型、杀伤肿瘤细胞的活性及其回输至肿瘤患者体内的免疫调节作用.方法 12例肿瘤患者共进行36次CIK细胞体外诱导、扩增,其中6例患者共18次扩增采用血细胞分离机采集PBMCs,另外6例患者共18次培养采用Ficoll密度梯度分离50 mL外周血方法采集PBMCs.结果采用血细胞分离机或Ficoll分离法采集PBMCs经体外诱导获得CIK(分别为A-CIK和F-CIK)细胞数分别为7.47×109(3.7-13.6×10)9和6.37×109(3.8-11.8×10)9.培养至14 d时,>90%的A-CIK和F-CIK细胞表型为CD3+,其中CD3+CD56+,NKG2D+细胞及细胞内TH1细胞因子均显著升高.效靶比为60:1时,A-CIK和F-CIK细胞对Daudi、K562及293的杀伤活性分别为(49.1±17.8)%和(55.3±11.5)%、(67.6±24.1)%和(58.1±17.6)%、(36.4±11)%和(33.7±14.8)%.给肿瘤患者回输自体A-CIK或F-CIK细胞14 d后,外周血中CD3+、CD8+及CD3+、CD56+细胞以及PBMCs内IFN-γ均显著升高.结论采集肿瘤患者50 mL外周血分离的PBMCs足以制备临床治疗使用的CIK细胞.
- 苏晓三汪珺张蕾金良昆陈睿王翼寅
- 关键词：免疫疗法过继细胞分离体外
- 小鼠骨髓源树突状细胞的体外培养及鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的建立小鼠骨髓源树突状细胞(bone marrow dendritic cell,BMDC)的培养方法并对其表型和功能进行鉴定.方法无菌取BALB/c小鼠股骨、胫骨中的骨髓细胞,以粒-巨噬细胞集落刺激因子体外诱导分化为BMDC,倒置显微镜动态观察BMDC增殖和形态变化情况,流式细胞术分析细胞表型,并检测其抗原吞噬功能.结果小鼠骨髓细胞体外诱导可获得大量未成熟和成熟BMDC,呈现典型的树突状形态.未成熟BMDC的细胞表型为CD11chighCD40lowCD86low MHC-IIlow,具有较强的抗原吞噬能力.未成熟BMDC经细菌脂多糖刺激后可分化为高表达CD11c、CD40、CD86及MHC-II类分子的成熟BMDC.结论体外诱导培养可获得小鼠骨髓来源的未成熟和成熟DC.
- 王翼寅陈睿汪珺苏晓三张蕾
- 关键词：树突状细胞小鼠近交系骨髓细胞
