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影响绵羊胞质内单精子注射结果相应因素的分析: 2013年; 本实验探讨了绵羊卵母细胞成熟以及胞质内单精子注射的相应影响因素,以期优化绵羊ICSI的操作技术和体外成熟体系。本研究分别设定3组卵母细胞成熟时间（19~21 h,23~25 h,28~30 h）,同时比较6、12点和7、11点注射位置对胞质内单精子注射后胚发育的影响。结果表明,绵羊卵母细胞在成熟23~25 h之间进行单精子注射后,其囊胚率显著高于19~21 h和28~30 h[（6.30±0.59）%vs（4.05±0.63）%,（3.59±0.29）%],研究注射位置对胚胎发育影响时研究结果显示,在6、12点注射后其胚胎的卵裂率（54.17±3.24）%vs（46.40±3.22）%和囊胚率（5.88±0.30）%vs（2.77±0.15）%均明显高于7、11点。因此,应尽量使用成熟23~25 h的绵羊卵母细胞进行胞质内单精子注射,同时注射时应选择6、12点的位置,从而利于胚胎的后期发育。; 朴学娇郑雪莹曹玉桃张帆翟春东刘云海倪和民郭勇; 关键词：体外成熟胞浆内单精子注射胚胎发育

利用脂质体法建立转Toll样受体4基因大尾寒羊胎儿成纤维细胞株的研究: 2016年; 利用脂质体转染法获得转Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)基因的成纤维细胞,将其作为供体细胞,再通过体细胞核移植技术构建重构胚,最终生产出转TLR4基因且性别可控的大尾寒羊。本研究通过原代培养大尾寒羊胎儿皮肤成纤维细胞,并进行SRY基因性别鉴定,利用脂质体转染法转入TLR4基因,然后分别从形态学与分子水平检测TLR4基因的表达,将稳定表达转TLR4的成纤维细胞核移植入绵羊去核卵母细胞中构建重构胚。最终获得5个稳定表达TLR4的阳性细胞克隆,经SRY基因性别鉴定为雌性细胞株,通过实时荧光定量PCR分析,在第4代转染的细胞中TLR4表达量最高,比未转染细胞高出7.4816倍(P<0.01),卵裂的重构胚中有EGFP的表达。试验成功构建出含TLR4基因的重构胚,为今后生产出性别可控的抗病转基因绵羊地方新品种奠定基础。; 邢书涵李方舟曹玉桃顾美超倪和民刘云海郭勇; 关键词：大尾寒羊脂质体转染重构胚

转TLR4基因的绵羊胎儿成纤维细胞系的建立被引量：2: 2013年; 为了通过脂质体介导的方法获得高效表达目的基因TLR4的绵羊胎儿成纤维细胞作为供体细胞,以便在胚胎移植前的体外筛选过程中确定优越的转基因供体细胞,从而提高体细胞核移植生产抗病转基因绵羊的效率。本研究通过优化脂质体与质粒载体的比例浓度,进而再去转染原代培养的绵羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选,以EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein)作为报告基因,从形态学与分子水平鉴定出已经稳定表达目的基因:Toll样受体4(Toll Like Receptor4,TLR4)基因的细胞系。最终经过筛选与纯化得到3个表达目的基因TLR4的细胞克隆,经RT-PCR与相对荧光定量PCR分析,在第二代转染的细胞中TLR4的表达最高,相对于未转染的绵羊胎儿成纤维细胞升高了9.65倍(P<0.01),并藉此为最终制备抗病转基因羊新品种,从提供稳定表达TLR4基因的转基因供体细胞系角度奠定基础。; 曹玉桃李方舟张全仓顾美超倪和民刘云海郭勇; 关键词：绵羊转基因克隆

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曹玉桃