李新培
- 作品数：8 被引量：57H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院特产研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项吉林省重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 牛病毒性腹泻病毒鉴定及分型RT-PCR检测方法的建立被引量：7
- 2018年
- 旨在建立一种特异性检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的RT-PCR方法,并且可以实现在同一体系中对BVDV进行分型。根据GenBank中公布的BVDV基因组序列,针对高度保守的5′UTR区域分别设计鉴定及分型引物,建立牛病毒性腹泻病毒鉴定及分型RT-PCR检测方法。应用鉴定RT-PCR检测方法可从BVDV阳性毒株中扩增出288bp的特异性片段;而分型RT-PCR检测方法可在同一体系中从BVDV1型和2型毒株中扩增出大小分别为316bp和110bp的特异性片段,但对猪瘟病毒、牛副流感3型病毒及牛传染性鼻气管炎病毒等均为阴性,最低可检测出的病毒量分别为1TCID50/mL和10TCID50/mL。临床试验证明,建立的鉴定及分型RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,具有很高的实用价值,为进一步开展流行病学调查、病毒分离等提供可靠的技术手段。
- 李新培朱洪伟朱洪伟关平原程世鹏程世鹏
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒反转录-聚合酶链反应
- 牛病毒性腹泻病毒E2基因生物信息学分析及可溶性表达被引量：1
- 2020年
- 为了获得牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2基因的最佳可溶性蛋白,本试验根据GenBank已公布的BVDV E2基因序列,利用DNAStar等软件进行生物信息学分析,截取抗原性和亲水性较高的序列进行稀有密码子优化,串联信号肽序列后合成并连接到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-Opti-E2;转化至E.coli BL21(DE3)宿主菌,经SDS-PAGE和Western blot分析,成功获得大小为43 kDa的BVDV E2基因的最佳可溶性蛋白,且该蛋白特异性较好。本试验E2蛋白的成功表达可为后续ELISA方法的建立和亚单位疫苗的开发奠定基础。
- 赵洪哲李新培范峻豪宋前进张静关平原温永俊
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒原核表达
- 3种配种方式对丹麦咖啡色水貂产仔性能的影响被引量：2
- 2016年
- 为探索不同配种方式对丹麦咖啡色水貂繁殖的影响,选取健康母貂270只,随机平分为A、B、C 3组,A、B、C 3组内各设3个平行组,依次为A_1、A_2、A_3,B_1、B_2、B_3,C_1、C_2、C_3组,每小组30只;A组母貂配种1次,B组母貂配种2次、C组母貂配种3次;配种方式为1,1+8,1+8+1。在相同的环境及饲养条件下进行饲养,观察统计母貂的产仔率、平均产仔数、平均存活数、妊娠期等指标。结果表明:A组和B组之间平均产仔数无明显差异,但A、B两组之间妊娠期差异极显著,且A组的平均产仔率与平均存活数明显低于B组;C组与A组之间平均产仔数差异显著,且A组妊娠期明显高于C组,但C组的产仔率和平均存活数远远大于A组。通过试验发现,采用1+8+1的方式配种,产仔率高,平均产仔数和平均存活数高。
- 孙亚茹彭安权张爱武杨帆赵航王建科李新培程世鹏
- 关键词：配种方式产仔性能
- 牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及其应用被引量：7
- 2019年
- 为制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)单克隆抗体(MAb)及其直接荧光标记抗体,本试验用纯化的牛病毒性腹泻病毒Ht01株免疫雌性BALB/c小鼠。间接ELISA测其血清效价,取抗体效价达标小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合。用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行2次亚克隆后注射入小鼠腹腔制备单抗腹水。利用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水,用间接免疫荧光试验测定其活性,用SDS-PAGE试验测定其纯度。经活性、纯度检测合格后,采用搅拌法与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联;用葡聚糖G-25 Medium介质进行分离纯化。结果,本研究共获得2株能够稳定分泌IgG1类型的阳性杂交瘤细胞株和一种直接荧光抗体,分别被命名为BMAb11、BMAb20、DB11。稳定性试验表明,杂交瘤细胞分泌的抗体稳定性好。ELISA、间接免疫荧光试验和直接免疫荧光试验表明,单克隆抗体和直标荧光抗体均与BVDV发生特异性反应,说明它们的特异性较好。经ELISA鉴定,腹水抗体效价达到1∶12 800。直接荧光抗体荧光素与蛋白的摩尔比(F/P)为3.34,标准值在2.0～4.0之间,符合标准。上述研究结果表明,本研究制备的单克隆抗体和直标荧光抗体可用于BVDV的检测,为BVDV的临床诊断奠定了基础。
- 赵洪哲范峻豪李新培王昊关平原温永俊
- HPLC法同时测定不同产地桔梗中3种聚炔类成分被引量：8
- 2018年
- 目的:建立测定桔梗中桔梗炔苷A、桔梗炔苷B和党参炔苷3种聚炔类化合物的HPLC测定方法,并测定我国不同产地桔梗中3种聚炔类化合物的含量。方法:采用加速溶剂萃取法提取,HPLC法测定聚炔类化合物含量。色谱条件:采用依利特Hypersil ODS2(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 m L·min^(-1),检测波长为210 nm。结果:不同产地的桔梗药材中聚炔类化合物含量差别较大。在所测的桔梗药材中,山东潍坊的桔梗含桔梗炔苷A最多,为43.3μg·g^(-1);湖北十堰产的桔梗中桔梗炔苷B含量最高,为82.3μg·g^(-1);四川马尔康的桔梗中党参炔苷含量最高,为461.8μg·g^(-1);山东潍坊产的桔梗3种聚炔类化合物总含量最高,为470.3μg·g^(-1);3种聚炔类化合物最少的都是吉林延边熏硫处理的桔梗。结论:加速溶剂萃取法提取桔梗中聚炔类化合物效果优于超声法、超临界萃取法和渗漉法,且用时最少,适用于聚炔类化合物提取;建立的HPLC方法操作简便,准确可靠,可用于桔梗药材中3种聚炔类化合物含量的测定。在我国不同产地桔梗药材中,桔梗3种聚炔类化合物含量的差异较大,可作为不同产地桔梗质量控制的一种评价指标。
- 陈宝李新培霍晓慧李志满李伟孙印石
- 关键词：桔梗党参炔苷高效液相色谱加速溶剂萃取
- 牛病毒性腹泻病毒致病机制研究进展被引量：31
- 2018年
- 牛病毒性腹泻(bovine viral diarrhea,BVD)和黏膜病(mucosal disease,MD)均是由牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)感染引发的传染病,严重威胁世界养牛业的发展。文章概述了BVDV分型及其分子生物学特征,并从急性感染、经胎盘或子宫感染、持续性感染和黏膜病4个方面总结了近期国内外BVDV致病机制的研究进展。根据序列保守性及是否致细胞病变可将BVDV分为两种基因型和两种生物型,其中,新发现的"HoBi"株归类为瘟病毒属。BVDV基因进化很快,基因组编码4种结构蛋白和8种非结构蛋白,编码蛋白在病毒的复制、翻译及在宿主致病过程中发挥重要作用。BVDV致病机制复杂,急性感染会造成病毒血症、繁殖障碍、免疫抑制等,急性感染牛发生腹泻的原因与BVDV感染胃肠道的肌层、黏膜下层并干扰肠道神经的正常功能相关,非致细胞病变型(NCP)BVDV是造成急性感染的病因。胚胎感染BVDV取决于病毒首次侵袭时胎儿在子宫内的生长阶段。NCP型BVDV具有抑制胎儿体内产生Ⅰ型干扰素的能力,致使该病毒在宿主中得以生存并形成持续性感染牛,当持续性感染牛再次感染与NCP型BVDV高度同源的致细胞病变型(CP)毒株时直接诱发黏膜病。两种生物型的产生是发生持续性感染和黏膜病的重要因素,NCP型可向CP型BVDV进行转化。本综述有助于发现控制BVD-MD传播的新途径,为消灭该病和新型疫苗的研制提供参考。
- 李新培周伟光关平原程世鹏程世鹏
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒急性感染
- 酸马奶中一株具有高效抑菌活性的乳酸菌的分离与鉴定被引量：1
- 2018年
- 乳酸菌作为益生菌对人体健康十分有益,近年来关于益生菌的研究及应用发展较快。为了开发优质乳酸菌资源,试验采用常规的细菌分离鉴定方法,从酸马奶中分离了46株乳酸杆菌和24株乳酸球菌,对抑菌活性较强和生长较快的菌株进行生理生化初步鉴定,并在分子水平上进行保守基因16S rRNA和gyrB基因鉴定。结果表明：分离到的XM-38菌株具有较强的抑菌活性（可抑制大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、单增李斯特菌、枯草芽孢杆菌）,XM-48菌株具有生长优势但没有明显的抑菌活性;结合生理生化和分子水平序列聚类分析,发现XM-38为干酪乳杆菌,XM-48为一株新的乳酸菌菌株。
- 贾燕宋前进李新培关平原温永俊
- 关键词：乳酸菌酸马奶体外抑菌抗菌
- 狂犬病病毒G蛋白V区特异性单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2017年
- 为制备狂犬病病毒糖蛋白(G蛋白)特异性单克隆抗体(McAb)及鉴定其识别范围,采用人工合成多肽"PPDQLVNLHDFRSDEIEHLVVEE"与KLH的偶联物免疫小鼠,经筛选制备出1株阳性杂交瘤细胞,记作4D3,其亚类鉴定为IgG2b/κ链。构建了真核表达载体pCAGGS-G/pCAGGS-13G,经鉴定可正确表达G蛋白,用于鉴定McAb。免疫荧光与Western-blot分析显示,该株McAb与真核表达的人工减毒株LBNSE G蛋白可发生特异反应,而与强毒株IMDRV-13的G蛋白不反应。本试验结果可为进一步研究G蛋白的结构、功能和毒株的初步筛查提供参考。
- 汪孟航朱洪伟刘莹刘杏李新培王西西杨勇孙娜程世鹏温永俊
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白真核表达单克隆抗体
