李莹 作品数:4 被引量:6 H指数:2 供职机构: 徐州医学院附属医院 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
荷载人生存素的多表位树突状细胞疫苗的抗肿瘤活性研究 被引量:2 2011年 目的:观察荷载人生存素(survivin)的多表位树突状细胞(DC)疫苗的抗肿瘤活性。方法:分别将含4个sur-vivin的HLA-A2类限制性CD8+CTL表位和1个CD4+Th细胞表位的重组真核表达质粒pPIRESneo3.0-survivin(4)/Th,以及含4个CD8+CTL表位的重组质粒pPIRESneo3.0-survivin(4),转染人DC并制备DC疫苗。实验分为survivin(4)/Th组、survivin(4)组、空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组。DC疫苗作用后,MCF-7细胞的凋亡率明显高于survivin(4)组(P<0.05),亦明显高于空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组(P<0.05)。运用流式细胞术(FCM)分别检测DC表面CD83、CD86、T淋巴细胞表面CD4、CD8a的表达以及DC疫苗作用后MCF-7乳腺癌细胞的凋亡。用ELISA法检测上清中IFN-γ的含量。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测DC疫苗诱导的CTL对MCF-7细胞的抑制率。结果:流式细胞术检测显示,人DC高表达CD83、CD86;人外周血T淋巴细胞高表达CD4、CD8a;survivin(4)/Th组IFN-γ的含量[(66.50±3.34)ng/L]明显高于survivin(4)组[(46.10±1.35)ng/L]、空质粒组[(25.17±0.32)ng/L]、未转染DC与T细胞共培养组[(25.47±0.95)ng/L]和单独T淋巴细胞组[(23.73±0.50)ng/L],P<0.05。survivin(4)/Th组中MCF-7细胞的抑制率明显高于survivin(4)组、空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组(P<0.05)。DC疫苗作用后,MCF-7细胞的凋亡率[(10.63±0.29)%]明显高于survivin(4)组(P<0.05),亦明显高于空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组(P<0.05)。结论:荷载多个survivin的CD8+CTL表位的树突状细胞肿瘤疫苗具有很强的抗肿瘤活性,CD4+Th细胞对CD8+CTL的抗肿瘤方面有明显的促进作用。 郭萌 王效远 宋文哲 李向农 梁骁 李莹 黄智龙关键词:生存素 表位 树突状细胞 肿瘤疫苗 Survivin多表位真核表达载体的构建及其在树突状细胞中的表达 被引量:3 2011年 目的:构建人生存素(survivin)的多表位真核表达载体,并在人树突状细胞(DC)中进行表达。方法:人工合成含4个survivin的HLA-A2类限制性CD8+CTL表位和一个CD4+Th表位的重组cDNA片段,克隆到pBluescript II SK(+)载体上,测序正确后将目的基因连接到真核表达载体pIRESneo3.0中,构建的重组真核表达质粒pPIRESneo3.0-survivin(4)/Th。将其转染人DC并筛选,进行稳定表达。结果:构建了含有survivin的多表位真核表达载体,并成功地转染了人DC。结论:成功地构建了含有survivin的多表位真核表达载体,并在人DC中稳定表达,为进一步研究多表位肿瘤疫苗奠定基础。 王效远 宋文哲 李向农 郭萌 梁骁 李莹关键词:SURVIVIN 多表位 树突状细胞 肿瘤疫苗 多表位肿瘤疫苗的研究进展 被引量:1 2012年 多表位疫苗是指同时携带多个与目标抗原相关的表位以及辅助性表位的疫苗。因其在细胞免疫方面的独特优势,已成为肿瘤疫苗研究领域的热点之一。随着分子生物学及免疫学等学科的飞速发展,使得多表位疫苗的临床应用也有了很大的进展。本文主要对多表位疫苗的选择、设计及临床应用等方面作一综述。 李莹 郭萌 宋文哲关键词:多表位疫苗 癌症疫苗 分子生物学 乳腺癌外周血cfDNA ErbB-2启动子区甲基化状态及与肿瘤Her-2表达的关系 2015年 目的探讨非转移乳腺癌患者外周血中游离无细胞的DNA(cfD NA)中ErbB-2基因启动子区5’CpG甲基化状态及其与肿瘤组织中Her-2表达的关系。方法分离非转移乳腺癌患者外周血中的cfD NA,利用重亚硫酸盐测序法(BSP)对分离出的cfD NA及外周血细胞DNA的ErbB-2基因启动子区进行5’CpG甲基化分析,免疫组化及FISH方法检测肿瘤组织中Her-2的表达情况。结果 ErbB-2基因启动子区5’CpG的甲基化只在乳腺癌患者的血浆cfD NA中检测到(19/40),在其对应的外周血血细胞中未发现;乳腺癌患者外周血cfD NA的ErbB-2基因启动子区5’CpG甲基化和其肿瘤组织Her-2的表达成负相关。结论乳腺癌患者外周血cfD NA ErbB-2启动子区5’CpG的甲基化状态与肿瘤组织Her-2表达呈负相关。提示外周血cfD NA ErbB-2启动子区5’CpG甲基化状态能从某种程度上反映乳腺癌患者肿瘤组织Her-2表达情况,有可能作为乳腺癌Her-2状态观察的新窗口,可用于帮助乳腺癌分子分型判断,是否能作为乳腺癌治疗的新靶点,并作为Her-2阳性患者早期诊断的指标,尚有待于进一步研究。 梁骁 郭萌 宋文哲 李莹 祝志强关键词:乳腺癌 BSP HER-2 ERBB-2 甲基化