李金荣 作品数:6 被引量:20 H指数:3 供职机构: 宁夏大学农学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
产苦马豆素疯草内生真菌实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:3 2021年 根据疯草内生真菌苦马豆素合成基因簇中swnK基因KS区域设计引物,构建SYGR Green I实时荧光定量PCR检测方法,初步分析黄花棘豆植物样品中内生真菌生物量与苦马豆素含量的关系。结果表明,基于swnK基因KS区域构建的实时荧光定量PCR法特异性较好,灵敏性较高,当真菌起始DNA浓度在0.009~90ng/μL范围时,内生真菌起始DNA浓度的对数值与Ct值呈负相关,内生真菌DNA的最低检出限为0.009ng/μL。在此基础上对黄花棘豆内生真菌生物量的分析表明,苦马豆素含量与内生真菌生物量呈正比。用于疯草内生真菌生物量检测时,基于swnK基因KS区域构建的实时荧光定量PCR方法特异性要高于基于ITS序列构建的方法,其灵敏度、检测限与后者相当,可用于疯草中产苦马豆素内生真菌的定量分析。 毛彦妮 余永涛 赵清梅 郭仕辉 田新岳 张浩东 李金荣 李金荣关键词:实时荧光定量PCR 苦马豆素 当归颗粒剂与煎剂有效成分及体外抑菌活性比较 被引量:6 2017年 为了比较当归颗粒剂与煎剂在有效成分和药效上的差异,采用薄层色谱法(TLC)鉴定当归颗粒剂;高效液相色谱法(HPLC)测定颗粒剂、煎剂和对照药材中阿魏酸的含量;应用《中药色谱指纹图谱相似度评价》软件对颗粒剂、煎剂进行相似度评价,同时进行体外抑菌试验。结果表明,当归颗粒剂TLC图中存在当归对照药材的特征斑点,与对照药材HPLC特征图谱相似度达95.1%;颗粒剂、煎剂和对照药材中阿魏酸的含量分别为3.95、1.69、2.84mg/g;抑菌结果为金黄色葡萄球菌、沙门菌抑菌圈颗粒剂和煎剂相同,大肠埃希菌、链球菌抑菌圈颗粒剂>煎剂。通过试验发现,当归颗粒剂中有效成分与对照药材相近,体外抑菌结果优于煎剂。 孙鹏 张鑫 贺凯 潘琼 王爽 李金荣 郭亚男 曹思婷 白晓南 何生虎关键词:煎剂 薄层色谱法 体外抑菌 甲基磺酸乙酯诱变的棘豆链格孢菌菌株苦马豆素合成基因簇相关基因表达模式分析 被引量:1 2022年 旨在对棘豆链格孢菌SWN基因簇各基因表达模式与苦马豆素合成的相关性进行分析。本研究应用甲基磺酸乙酯(EMS)对棘豆链格孢菌UA003诱变处理,筛选苦马豆素产率显著变化的诱变菌株。对棘豆链格孢菌UA003、EMS诱变菌株及甘肃链格孢菌EA菌株SWN基因簇AATL、swnR、swnN、swnH1、swnH2、swnK(A、KS、SDRe1、SDR)等基因的表达水平和swnK基因的突变位点进行分析。结果表明:E02、E23和E25等诱变菌株苦马豆素产率显著增加,其AATL、swnR、swnN、swnH1及swnH2等基因表达显著下调(P<0.05或P<0.01),A、KS、SDR和SDRe1基因表达显著上调(P<0.05或P<0.01)。突变菌株E02 swnK基因13个核苷酸位点发生突变,其氨基酸序列6个位点发生突变。与UA003相比,EA菌株163个核苷酸位点不同,氨基酸序列67个位点不同,其编码产物起始段缺失一段由MLTPAVSLKNLTKPK组成的氨基酸序列,在AT基因编码产物的1135与1143处插入了一段由TEVDGVP组成的氨基酸序列。综上所述,EMS诱变处理能显著改变棘豆链格孢菌的苦马豆素合成能力及SWN基因簇各基因的表达水平。其SWN基因簇中AATL、swnR、swnN、swnH1、swnH2等基因的表达模式与苦马豆素合成呈现负相关,A、KS、SDR和SDRe1等基因的表达模与苦马豆素合成呈现正相关,EMS突变菌株苦马豆素合成的变化可能与SWN基因簇相关基因结构和功能的变化有关。 余永涛 毛彦妮 赵清梅 李金荣 李金荣 白晓南 张浩东关键词:苦马豆素 牛支原体生长规律与研究方法的探究 被引量:1 2018年 为了探明牛支原体(Mycoplasma bovis)的生长规律,试验选择2种探究方法,即测量菌液OD600值和活菌计数的方法,测定牛支原体NP2株不同培养时段的生长情况,并绘制牛支原体在改良Thiaucort’s培养基上的生长曲线,对牛支原体的生长规律进行探究。结果表明:牛支原体迟缓期在培养14 h内,培养30 h可达到平台期,50 h后进入衰老期;平均OD600值最高为0.134,平均生长滴度最高为1.0×10^10CCU/mL,世代时间为117.4 min;同时2种方法的结果基本一致。说明牛支原体生长规律与多数细菌相似,分为迟缓期、对数生长期、平台期、衰老期;在研究生长情况时,可以用测量菌液OD600值的方法代替较为繁琐的活菌计数法。 郭朋辉 张鑫 何生虎 郭亚男 曹思婷 王爽 徐婧祎 孙鹏 白晓楠 李金荣关键词:牛支原体 OD值 直立黄芪中产苦马豆素真菌的分离与鉴定 被引量:7 2018年 为了确定直立黄芪中是否存在能产生苦马豆素的真菌及该类真菌与链格孢属波状芽管孢组疯草内生真菌的遗传进化关系,对直立黄芪植物组织中的真菌进行了分离,应用ɑ-甘露糖苷酶抑制法和超高效液相色谱-串联质谱法对分离菌株菌丝中的苦马豆素进行分析,筛选能够产生苦马豆素的菌株。PCR法扩增产苦马豆素真菌的内部转录间隔区(ITS)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GPD)和β-酮脂酰合酶(β-ketoacyl synthase,KS)基因,测定其序列,进行序列一致性比对。基于ITS和GPD序列构建系统发育树,根据遗传进化分析结果和形态特征,对直立黄芪中的产苦马豆素真菌进行种属分类和命名。结果显示:从直立黄芪中共分离到43株真菌,其中有13株菌丝中含有苦马豆素,序列一致性和系统发育分析结果表明,该类真菌与已报道的直立黄芪病原真菌甘肃链格孢(Alternaria gansuense)和产苦马豆素疯草内生真菌(Alternaria Section Undifilum sp.)的亲缘关系最近。直立黄芪中存在能产生苦马豆素的真菌,根据形态特点和遗传进化分析结果,本研究将从直立黄芪中分离的产苦马豆素真菌划分到链格孢属波状芽管孢组中,并命名为甘肃波状芽管孢(Alternaria Section Undifilum gansuense)。 余永涛 李金荣 赵清梅 何生虎 何生虎 陈娟 毛彦妮关键词:苦马豆素 疯草内生真菌苦马豆素合成相关基因及其研究方法的进展 被引量:5 2019年 豆科棘豆属(Oxytropis)和黄芪属(Astragalus)有毒植物统称为疯草。疯草的营养价值丰富,是潜在的优良牧草。但家畜长期或过量采食后,可发生以神经机能紊乱为特征的慢性中毒病,称之为疯草中毒病[1]。中毒家畜表现为共济失调、瘫痪、流产、不孕、出生缺陷和死亡等。 毛彦妮 余永涛 赵清梅 何生虎 何生虎关键词:疯草 内生真菌 苦马豆素 功能基因 研究方法