焦扬
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：昆明医科大学分子临床医学研究院更多>>
- 发文基金：云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 人血管内皮生长因子A(VEGFA)的原核载体构建、蛋白表达及鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的克隆人VEGFA基因,与原核载体融合表达、纯化及其鉴定,并将其应用于肿瘤血管生长研究过程中.方法采用PCR方法扩增人VEGFA序列,将其克隆入p GEX-KG原核载体,获得p GEX-KG-h VEGFA重组质粒.将该质粒转化入E.coli菌株BL21(DE3),经IPTG诱导其表达,以GSTrap亲和层析柱纯化融合蛋白,采用SDS-PAGE电泳,Western Blot方法鉴定融合蛋白的表达.结果 PCR扩增获得了h VEGFA基因片段,经测序证实与Gen Bank公布的序列一致,重组的质粒载体经过PCR、酶切鉴定,证明重组质粒中已成功的插入了h VEGFA基因片段.成功构建了该蛋白的原核表达载体p GEX-KG-h VEGFA.结论融合蛋白在IPTG终浓度为0.5 mmol/L、25℃条件下诱导表达,并获得纯化融合蛋白.采用Western Blot的方法可检测到目的融合蛋白GST-h VEGFA的表达.
- 赵瑜胡月新卢敏南焦扬赵洪波刘建军
- 关键词：VEGFA原核载体融合蛋白
- 羊水干细胞体外培养早期和后期基因表达谱分析
- 2013年
- 目的探讨羊水干细胞(amniotic fluid stem cells,AFSCs)体外培养早期和后期全基因组表达规律.方法在公共基因芯片数据库GEO中找到羊水干细胞相关的基因芯片数据,使用R和Bioconductor软件包对其进行统计学分析,筛选差异表达基因,并进行GO分析和KEGG通路分析.结果通过线性模型没有找到差异表达基因,而通过秩积法找到217个上调探针,278个下调探针.对这些差异表达基因进行功能富集,上调的生物过程是胶原纤维组织相关过程、细胞外基质组织、胞外结构组织、骨骼系统发育、细胞粘附等.下调过程最显著的是核分裂过程,有丝分裂以及细胞周期相关过程.上调的通路为ECM受体交互通路和焦点粘附通路.下调通路分别是细胞周期,细胞因子受体交互通路,p53信号通路和卵母细胞减数分裂通路.结论体外培养中AFSCs能很好地维持基因的表达.
- 焦扬刘建军冯国华于明赵洪波
- 关键词：体外培养基因表达
- 人肿瘤抗原基因Delta-like4(DLL4)可溶性表达、纯化及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的研究克隆肿瘤抗原人DLL4基因,与原核表达载体可溶性融合表达、分离纯化及其鉴定,并计划将其应用于DLL4特异性肺癌肿瘤疫苗研究过程中的抗血清滴度检测.方法采用PCR方法扩增DLL4多核苷酸序列,克隆入pMD-18T载体.测序正确后,将其亚克隆入pGEX-KG原核表达载体,获得pGEX-KG-hDLL4载体.以该载体转化E.coli菌株BL21(DE3),IPTG诱导其表达,裂解大肠杆菌,以GSTrap亲和层析柱纯化目的蛋白,采用SDS-PAGE电泳,Western Blot方法鉴定目的蛋白的表达.结果 PCR扩增获得了hDLL4基因片段,经测序证实与GenBank公布的序列一致,重组的质粒经过PCR、酶切鉴定,证明重组质粒中已成功的插入了目的基因hDLL4.成功构建了该蛋白的原核表达载体pGEX-KG-hDLL4.结论融合蛋白GST-hDLL4在25℃,IPTG终浓度0.5 mmol/L条件下诱导表达,以GSTrap亲和层析柱纯化,获得纯化融合蛋白.采用SDS-PAGE,Western Blot的方法可检测到目的可溶性融合蛋白GST-hDLL4的表达.
- 刘建军胡月新焦扬赵瑜杨静何保丽
- 关键词：DLL4原核表达融合蛋白
