金晶
- 作品数：14 被引量：7H指数：2
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 鸡Dazl基因启动子活性检测及其诱导剂的初步筛选被引量：1
- 2016年
- 论文旨在确定Dazl基因核心启动子活性调控区,并比较不同诱导剂的诱导效率,筛选出最佳基因诱导剂。用PCR技术扩增不同长度的Dazl基因启动子,插入到pEGFP-N1和/或pGL3-basic载体中,构建重组载体;再将这些重组载体分别转染DF-1细胞系和GC-1细胞系,使用双荧光素酶报告基因检测系统测定其转录活性,确定Dazl基因启动子核心活性区域;添加单因素或多因素诱导因子,比较不同诱导剂以及诱导剂组合对鸡Dazl基因启动子活性的影响大小。如皋黄鸡Dazl基因的-932bp^-186bp区域在DF-1和GC-1两种细胞中,都有不同程度的启动活性,而-186bp^-39bp启动子活性几乎完全丧失;诱导剂筛选结果表明,FSH+E2组和Am80组、E2组能够显著提高Dazl基因启动子的活性,RA组、ATRA组、FSH组和睾酮组都不同程度地提高了启动子的活性,而睾丸提取液和BMP4对启动子活性没有显著影响。通过体外诱导实验筛选出如皋黄鸡Dazl基因最适诱导剂,为鸡ESCs体外向雄性生殖细胞分化的细胞诱导剂进一步筛选奠定了基础。
- 金晶朱睿王颖洁左其生王曼张文慧张亚妮李碧春
- 关键词：核心启动子
- 成纤维生长因子8(FGF8)对鸡胚胎干细胞向精原干细胞分化的研究
- 精原干细胞(SSCs)的形成为精子的发生提供了基础.成纤维细胞生长因子家族对SSCs的形成至关重要,FGF8调控SSCs生成的功能需要深入研究.
目的：本试验旨在研究FGF8对鸡胚胎干细胞(ESCs)向精原干细...
- 王曼金晶张文慧李婷婷左其生张亚妮李碧春
- 关键词：鸡胚胎干细胞精原干细胞细胞分化
- 鸡胚成纤维细胞单克隆细胞系的建立
- 目的：本研究旨在建立一套原代鸡胚成纤维细胞(primary stage chicken embryonic fibroblast,pCEF)的单克隆建系方法,以期获得具有高均一度的单克隆细胞系从而解决原代细胞均一度低和培...
- 赵瑞丰靳锴张晨金晶王颖洁左其生张亚妮李碧春
- 关键词：鸡胚成纤维细胞
- 鸡原始生殖细胞中lncRNA-CEPT8编码小肽能力的研究被引量：1
- 2019年
- 为探究IncRNA在鸡生殖细胞中的调控作用,以如皋黄鸡受精蛋为试验材料,基于高通量测序筛选结果,利用 RACE技术获取lncRNArCEPT8序列全长,通过荧光定量检测和核质分离试验确定IncRNArCEPTS的富集位置,并进行ORF开放阅读框预测及构建原核融合表达载体,提取蛋白质后利用Western blot技术检测加cRNA-CEPT8编码的小肽。结果表明:lncRNA-CEPT8全长为1 248 bp,在鸡原始生殖细胞质中富集,具有大小为246 bp且编码81个氨基酸的ORF, Western blot检测结果表明lncRNArCEPT8编码一条大小约为9 ku的小肽。这一研究为进一步探究ln- cRNA-CEPT8编码的小肽在鸡原始生殖细胞中的调控作用及其对生殖细胞的影响奠定了基础。
- 余昕健靳锴金晶左其生赵瑞丰李碧春
- 关键词：小肽
- 口吸管法制备DF-1单细胞克隆
- 取对数期末的DF-1细胞,通过手工拉针连接橡皮管制备的单细胞分离装置,于倒置显微镜下收集DF-1单细胞.收集的单细胞培养于同源条件培养基中,形成单细胞克隆之后传代并建立DF-1单克隆细胞系;采用连续细胞计数绘制DF-1单...
- 赵瑞丰靳锴金晶王颖洁李东左其生张亚妮李碧春
- 关键词：条件培养基染色体核型分析
- HSD3B2通过甾类激素合成通路调控鸡ESCs 向雄性生殖细胞分化
- 精原干细胞可以替代胚胎干细胞进行基因治疗和遗传操作而不涉及伦理道德,目前被广泛的应用和研究,但是对精原干细胞形成过程中具体的调控方式却少有研究.
目的：本研究旨在探索甾类激素合成通路在鸡雄性生殖细胞分化过程中的...
- 张晨王曼何娜娜汪怡临赵瑞丰余昕健金晶左其生张亚妮李碧春
- 关键词：鸡胚胎干细胞雄性生殖细胞细胞分化甾类激素
- Nanos2调控鸡ESCs 向雄性生殖细胞分化的研究
- 本研究旨在探究Nanos2对雄性生殖细胞分化生成过程中的生物学功能,为完善鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)向雄性生殖细胞诱导分化体系研究提供依据.qRT-PCR检测成体公母鸡不同组织中N...
- 张文慧王颖洁李东何娜娜王曼金晶左其生张亚妮李碧春
- 关键词：鸡胚胎干细胞雄性生殖细胞细胞分化
- HSD3B2通过甾类激素合成通路调控鸡雄性生殖细胞形成
- 1引言精原干细胞可以替代胚胎干细胞进行基因治疗和遗传操作而不涉及伦理道德，目前被广泛的应用和研究，但是对精原干细胞形成过程中具体的调控方式却少有研究。本研究旨在探索甾类激素合成通路在鸡雄性生殖细胞分化过程中的作用，为构建...
- 张晨王曼何娜娜汪怡临赵瑞丰余昕健金晶左其生张亚妮李碧春
- 关键词：雄性生殖细胞分化
- 鸡lncRNA-CEPT8启动子验证及活性核心区域筛选被引量：1
- 2020年
- 研究旨在筛选鸡lncRNA-CEPT8启动子核心区域并验证其启动活性。采用qRT-PCR检测lncRNA-CEPT8在鸡不同组织中表达情况。生物信息学预测lncRNA-CEPT8启动子区域,PCR扩增启动子并构建pEGFP-lncCEPT8重组载体,转染DF-1细胞后48 h进行荧光观察。再构建启动子系列缺失载体(pGL3-p1、pGL3-p2、pGL3-p3、pGL3-p4、pGL3-p5),分别转染DF-1细胞后48 h检测双荧光素酶活性,分析缺失载体的启动活性。结果表明,lncRNA-CEPT8在鸡生殖嵴中特异性高表达,pEGFP-lncCEPT8重组载体转染DF-1细胞后有绿色荧光。缺失载体pGL3-p4与pGL3-p3相比,活性极显著下降(P<0.01)。研究明确了lncRNA-CEPT8上游-1174^-1 bp处为启动子,且-627^-429bp是启动子核心区域,为进一步研究其表达调控机制提供理论依据。
- 金晶余昕健靳锴李婷婷李婷婷左其生张晨
- 关键词：启动子
- STAT1和组蛋白乙酰化修饰调控鸡lncRNA-BMP4转录研究
- 2022年
- 【目的】探讨影响鸡长链非编码RNA(long chain noncoding RNA,lncRNA)-骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)启动子转录的因素,并对调控lncRNA-BMP4特异表达的分子机制进行研究。【方法】以鸡肌肉基因组为模板,PCR扩增并克隆鸡lncRNA-BMP4的启动子区,构建lncRNA-BMP4-EFGP载体,对lncRNA-BMP4启动活性进行定性分析;通过染色体5′-末端缺失的方法和双荧光素酶系统检测筛选lncRNA-BMP4启动子核心区域。通过在线工具预测分析调控核心区域的潜在转录因子;利用点突变和双荧光素酶系统筛查真正影响lncRNA-BMP4的转录因子;通过表观修饰验证DNA甲基化、组蛋白乙酰化对lncRNA-BMP4的转录调控作用。【结果】试验成功扩增lncRNA-BMP4启动子片段1288 bp,与pEGFP-N1载体连接后转染鸡成纤维细胞系(DF-1)具有荧光表达,说明lncRNA-BMP4启动子有启动活性。染色体5′-末端缺失和双荧光素酶系统检测发现,核心启动子区域为―832~―651 bp,Jaspar数据库分析筛选到核心区域的转录因子有SOX17、CREB1及STAT1。双荧光素酶系统检测发现,STAT1可促进lncRNA-BMP4核心启动区域的活性;DNA甲基化抑制剂5′-Azacd对lncRNA-BMP4的转录活性未有任何影响,而组蛋白乙酰化抑制剂TSA可极显著提高其转录活性(P<0.01)。【结论】提示lncRNA-BMP4的转录活性受STAT1和组蛋白乙酰化的正调控,而DNA甲基化不影响其转录。研究结果为详细解析lncRNA-BMP4的功能和分子机制提供了理论依据。
- 高晓敏周舒简陈晨金晶胡菜张晨左其生张亚妮陈国宏李碧春
- 关键词：启动子STAT1表观遗传修饰
