陈俊勇
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南京大学生命科学学院分子医学研究所更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定
- 2006年
- 构建了含有人白细胞介素-hIL-10(Human Interleuk in 10,hIL-10)基因的重组质粒,在大肠杆菌中的高效表达,并对其生物学活性进行了鉴定.用RT-PCR扩增hIL-10 cDNA,并插入原核表达载体PET-32b.将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞,在37℃用IPTG诱导hIL-10表达.表达的重组蛋白经复性纯化后,用夹心ELISA法检测其对外周血单核细胞(PBMC)合成IFN-γ的抑制作用.重组质粒PET-32b/hIL-10的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列和文献报道的hIL-10 cDNA序列一致.SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为18 000.活性测定结果显示,重组蛋白能显著抑制PBMC合成IFN-γ.这表明构建的PET-32b/hIL-10可以在大肠杆菌中高效表达,经复性和纯化后,获得了具有高纯度和活性的hIL-10.
- 王旻东孙自勇陈俊勇吴盛智强刘建宁
- 关键词：克隆大肠杆菌生物学活性夹心ELISA
- Hirulog18在大肠杆菌中的表达及其生物学活性检测
- 2006年
- 以化学合成的H iru log 18基因为模板,经PCR扩增、限制性内切酶Xho I和Kpn I消化,将编码H iru-log 18的基因片断插入表达载体pET-32b中编码硫氧化还原蛋白(Trx)基因序列的下游.用重组质粒转化感受态大肠杆菌-BL21(DE3),并用IPTG诱导表达Trx-H iru log 18融合蛋白.复性、肠激酶酶切、N i-Sepharose和HPLC纯化后,用质谱测定其分子量并进行活性测定.检测结果表明构建的PET-32b/H iru log 18能够在大肠杆菌中高效表达,表达的H iru log 18具有较低的凝血酶抑制活性并能够竞争抑制Angiomax活性.
- 王东孙自勇陈俊勇邓华玲王莹唐艳春刘建宁
- 关键词：克隆融合蛋白HPLC
