马晓军
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：陕西中医药大学基础医学院生物学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- pSilencer 3.1-Sirt3基因RNA干扰表达载体的构建及鉴定
- 2017年
- 目的构建Sirt3基因的RNA干扰载体,并在真核细胞中进行pSilencer 3.1-Sirt3的功能鉴定。方法利用体外DNA合成技术及液相色谱纯化技术合成Sirt3干扰序列,通过酶切将干扰序列连接至pSilencer 3.1载体中,将阳性克隆载体转入感受态大肠杆菌细胞后,筛选阳性克隆,通过第二代体外DNA测序技术进行序列测定。将测序正确的克隆用于Western blot实验和real time PCR实验,以对其在真核细胞中的正确表达和内源性Sirt3的干涉效果进行鉴定。结果 PCR扩增得到序列测定结果与干扰序列完全一致。构建的pSilencer 3.1-Sirt3质粒在AGS和SGC-7901细胞中进行基因的转染,pSilencer3.1-Sirt3能够有效抑制内源性Sirt3的mRNA水平和蛋白质水平的表达。结论成功构建获得Sirt3干扰载体,并有效降低Sirt3的mRNA和蛋白质水平的表达,为今后Sirt3的功能研究提供良好的基础。
- 曲璇李军马晓军韩洛川史海龙
- 关键词：RNA干扰
- Sirt3过表达载体的构建及表达
- 2016年
- 目的:在HEK293细胞中获得Sirt3全长基因,构建其高效真核表达载体。方法:提取人HEK293细胞总RNA,反转录合成c DNA,以特异性引物扩增Sirt3全长基因并克隆入pc DNA3.1载体,筛选阳性克隆进行序列测定后,鉴定其表达情况。结果:PCR扩增得到特异性的约1000 bp的片段,序列测定结果表明与国外已发表的序列完全一致;将构建的pc DNA3.1-Sirt3质粒转入AGS和SGC-7901细胞,检测到Sirt3的m RNA和蛋白表达水平均提高。结论:构建获得Sirt3基因高效真核表达载体,将用于Sirt3的功能研究。
- 曲璇张芮李军左艳万文涛马晓军袁银娜韩洛川史海龙申亮亮
- 关键词：基因扩增真核表达载体
- Skp2过表达载体的构建及表达被引量：1
- 2016年
- 目的:在HEK293细胞中获得Skp2全长基因,构建其高效真核表达载体。方法:提取人HEK293细胞总RNA,反转录合成c DNA,以特异性引物扩增Skp2全长基因并克隆入p Babe载体,筛选阳性克隆进行序列测定后,鉴定其表达情况。结果:PCR扩增得到特异性的约1300 bp的片段,序列测定结果表明与国外已发表的序列完全一致;将构建的p Babe-Skp2质粒转入HEK293细胞,与空质粒对照相比,Skp2的m RNA和蛋白表达水平均提高,并且p27蛋白水平降低。结论:构建获得Skp2基因高效真核表达载体,将用于Skp2的功能研究。
- 曲璇张芮李军左艳万文涛马晓军袁银娜韩洛川史海龙申亮亮
- 关键词：SKP2基因扩增真核表达载体
- SKP2突变载体S72A和S72D的构建以及生物学功能研究
- 2017年
- 目的构建SKP2突变载体SKP2S72A和SKP2S72D并验证其生物学功能。方法利用一步法PCR合成含有SKP2S72A和SKP2S72D突变序列,通过酶切连接将序列插入p Babe载体中,将克隆载体转入大肠杆菌后,筛选阳性克隆进行序列测定,将鉴定正确的克隆转染HEK293细胞,并利用Western blot实验鉴定基因表达及其对靶蛋白P27的影响。结果PCR扩增得到序列测定结果与预期序列完全一致;构建的SKP2S72A和SKP2S72D突变质粒,用于基因转染纯度较好,在真核细胞中成功表达,并且影响了P27的蛋白水平。结论构建获得SKP2突变载体,为今后SKP2泛素连接酶活性的功能研究提供良好的基础。
- 曲璇李军马晓军韩洛川史海龙
- 关键词：S期激酶相关蛋白
