基于金纳米颗粒(AuNPs)比表面积大、尺寸小和能够承载大量DNA片段的特点,建立了一种免标记、简便、快速检测DNA聚合酶Klenow fragment exo-(KF-)的电化学方法.首先将巯基化的DNA引物片段修饰在金电极上,然后加入模板DNA链以及修饰有报告DNA链的金纳米颗粒(AuNPs-DNA),模板DNA链能同时与DNA引物片段和修饰在AuNPs上的报告DNA链进行互补杂交形成"三明治"结构,从而将AuNPs-DNA修饰在电极表面;当加入电活性物质钌铵(RuHex)后,RuHex可通过静电吸附作用结合在DNA上.AuNPs上修饰的报告DNA链能够吸附大量RuHex,导致电化学信号放大.当加入脱氧核糖核苷三磷酸(dNTPs)以及KF-聚合酶后,引物片段发生延伸反应,将与模板DNA链杂交的AuNPs-DNA竞争下来,带走大量的RuHex,使电信号降低,从而实现对聚合酶的检测.实验结果表明,利用该方法可以检测到5 U/mL的KF-.
