采用苏丹黑B染色法,从海洋淤泥和岩石附着藻类中筛选得到一株高产油脂的海洋酵母菌,利用生理生化特征结合分子生物学方法进行目的菌株的鉴定,结果证明其为季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)。利用酸热法进行油脂提取,在单因素实验的基础上通过正交实验对提取条件进行优化。得到最优条件为:每0.5 g干菌体需4 mol/L盐酸10 m L,酸热时间10 min,有机溶剂氯仿-甲醇(体积比2∶1)25 m L,0.15%NaCl溶液10 m L。在最优提取条件下,油脂得率为40.12%。
微生物许多非核糖体肽类次生代谢产物主要是由非核糖体肽合成酶(NRPS)催化合成。参考Gontang发布的非核糖体肽合成酶(NRPS)通用引物设计扩增NRPS腺苷酰化结构域基因序列的特异引物,从海洋链霉菌L1的基因组DNA中扩增获得一个715 bp的NRPS基因序列。测序结果及比对分析表明该片段属于NRPS腺苷酰化结构域部分序列。对其拟翻译的氨基酸序列组成成分、理化性质进行分析,显示其包含AFD class I超基因家族核心结合区,为NRPS腺苷酰化结构域(A结构域)所在区域。对氨基酸序列的二级结构预测和三级结构模拟,发现与数据库中肠菌素合酶F组分的结构相似。为后续研究A结构域的特异性及完整NRPS基因簇克隆提供了参考。
