温红雨
- 作品数：19 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 紫花苜蓿MsMAX2的克隆及功能研究
- 2021年
- 【背景】分枝是重要的产量构成因子,在紫花苜蓿育种中至关重要。发掘紫花苜蓿分枝相关基因并明确其作用机理,有助于加快紫花苜蓿高产优质育种。MAX2是重要的分枝相关基因,参与多种植物的分枝调控。【目的】通过对紫花苜蓿MsMAX2功能的研究,为建立MsMAX2调控紫花苜蓿分枝发育分子机制奠定基础。【方法】利用同源克隆的方法从紫花苜蓿中获得MsMAX2的基因序列。通过Expy Protparatam、DNAMAN和MEGA-X等软件对MsMAX2进行序列分析并构建系统进化树。采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法分析MsMAX2在紫花苜蓿中的组织表达特异性。运用烟草瞬时表达系统确定MsMAX2蛋白的亚细胞定位。利用农杆菌介导的转化方法获得转基因拟南芥,以明确MsMAX2的基因功能。用酵母双杂交技术探明与MsMAX2互作的蛋白。【结果】MsMAX2包含长度为2136 bp的开放阅读框,编码由711个氨基酸构成的蛋白,属于F-box蛋白超家族。系统进化分析表明,MsMAX2及其同源基因的进化与物种的分化高度相似,表明其是一个功能保守的基因。MsMAX2在紫花苜蓿的颈部组织中表达量最高,苗期叶片和授粉当天的花序中表达量较高,根中次之,其他组织表达量相对较低,暗示其在紫花苜蓿多个组织中发挥作用。亚细胞定位试验表明MsMAX2蛋白定位于细胞核中。在拟南芥max2突变体中过表达MsMAX2可互补突变体的多分枝表型。酵母双杂交试验表明MsMAX2与激素受体D14存在依赖于独脚金内酯的相互作用。【结论】获得在紫花苜蓿颈部组织中高水平表达的MsMAX2,其编码的蛋白定位于细胞核中;MsMAX2在拟南芥多分枝突变体max2中过表达时,能够互补突变表型,表明MsMAX2参与植物的分枝调控,其功能保守。
- 马琳温红雨王学敏高洪文庞永珍
- 关键词：紫花苜蓿分枝酵母双杂交
- 紫花苜蓿MsGAI的克隆、表达及遗传转化被引量：3
- 2019年
- 【目的】DELLA蛋白属于GRAS家族,是赤霉素信号转导途径中重要的转录因子,负向调节GA转导途径。克隆获得紫花苜蓿GAI,分析其基因生物信息学特征并预测蛋白结构域。明确紫花苜蓿GAI组织表达特征及不同处理下的表达模式,构建该基因超表达载体并转入紫花苜蓿,以探究DELLA蛋白基因在紫花苜蓿赤霉素(GA)信号转导途径及胁迫条件下的作用机理。【方法】利用同源克隆的方法,从紫花苜蓿中克隆得到MsGAI。利用生物信息学方法分析该基因的序列特征,使用MEGA7.0对MsGAI蛋白序列及同源序列进行多序列比对,构建同源物种间的系统发育树。利用实时荧光定量PCR检测紫花苜蓿各组织GAI表达量以及在PEG、NaCl、GA、ABA和黑暗处理下,GAI的表达变化。同时对转基因GAI株系表达水平进行分析,选择表达量高、中、低株系(L5、L8、L11)分别进行PEG和NaCl处理,分析GAI的表达变化。以pBI121为基础载体,采用双酶切-连接的方法构建植物超表达载体35S:MsGAI-gus。将重组载体转入农杆菌GV3101菌株中,以紫花苜蓿叶片为外植体,采用农杆菌介导的愈伤组织转化法转化紫花苜蓿,经PCR检测和GUS组织化学染色,得到转基因阳性苗。【结果】该基因序列包含有一个1 818 bp的开放阅读框,编码605个氨基酸。生物信息学分析结果显示,MsGAI蛋白具有GRAS家族的典型结构域和保守区,其中包含N端保守结构域DELLA和TVHYNP,C端保守结构域SAW。多序列比对及系统进化树分析表明,该序列与其他物种的DELLA蛋白序列相似度均高达80%以上,将其命名为MsGAI。该基因与蒺藜苜蓿GAI亲缘关系最近,其次与鹰嘴豆、红三叶等双子叶豆科植物亲缘关系较近,与大麦等单子叶植物较远。实时荧光定量PCR分析表明,MsGAI在紫花苜蓿各组织中均有表达,根中的表达量最高。经PEG、NaCl、GA以及ABA处理后,均有明显响应;黑暗处理显著抑制MsGAI的表�
- 张涵王学敏刘希强马琳温红雨王赞
- 关键词：紫花苜蓿DELLA蛋白赤霉素同源克隆
- 高效稳定广谱紫花苜蓿遗传转化方法及其获得的转化体系
- 本发明公开了一种高效稳定广谱紫花苜蓿遗传转化方法及其获得的转化体系，包括以下步骤：(1)灭菌材料的准备；(2)农杆菌的准备；(3)侵染；(4)组织培养。本发明建立了农杆菌介导的紫花苜蓿高效遗传转化体系，为通过转基因技术深...
- 王学敏温红雨李俊武语迪王赞马琳高洪文
- 文献传递
- 东方山羊豆赤霉素受体基因GoGID转化紫花苜蓿的方法
- 本发明公开了一种东方山羊豆赤霉素受体基因GoGID转化紫花苜蓿的方法。其具体步骤包括：将GoGID基因插入到载体质粒DNA中；将插入有GoGID基因的载体导入到根癌农杆菌LBA4404中；农杆菌的培养；紫花苜蓿外植体的准...
- 王学敏李俊武语迪温红雨常鑫高洪文
- 文献传递
- 一种紫花苜蓿单荚结实率相关基因MsDAM及其应用
- 本发明公开了一种紫花苜蓿单荚结实率相关基因MsDAM，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示，所述的紫花苜蓿单荚结实率相关基因MsDAM，其编码的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:3所示，所述的紫花苜蓿单...
- 王学敏方志红武语笛温红雨王赞高洪文
- 一种饲用燕麦田的便携式取样器
- 本发明公开了一种饲用燕麦田的便携式取样器，本发明涉及燕麦田取样技术领域，包括茎叶取样机构，设置在支撑台的顶部，工作人员推动便携推手，所述行走轮带动抬高架体在田间行走，所述茎叶取样机构自上而下对取样植株的茎叶进行包覆。该饲...
- 马琳王学敏仪登霞温红雨
- 便于紫花苜蓿根系性状考察的水培装置
- 本实用新型便于紫花苜蓿根系性状考察的水培装置，包括培养支架、育苗管、遮光托盘，所述遮光托盘为上部开口且表面涂覆有黑漆层的长方体形中空壳体，所述培养支架置于所述遮光托盘内，所述培养支架包括长方形顶板及其下方的支撑架，所述顶...
- 王学敏武语迪温红雨高洪文王赞常馨
- 文献传递
- 一种紫花苜蓿种子收集装置
- 本实用新型公开了一种紫花苜蓿种子收集装置，包括收集箱本体；第二圆齿轮啮合有齿环，齿环的内侧设置有不完全齿，不完全齿啮合有第三圆齿轮，第三圆齿轮啮合有第四圆齿轮；第三圆齿轮的中心轴连接有第一圆齿轮；第一圆齿轮啮合有齿条，齿...
- 王学敏崔苗苗庞永珍温红雨
- 文献传递
- 东方山羊豆GoGID基因表达载体构建及紫花苜蓿转化被引量：4
- 2015年
- 根据已经克隆得到的东方山羊豆赤霉素受体(GoGID)基因,扩增编码区cDNA。以pBI121为基础载体,采用酶切连接法,构建植物超表达载体pBI121-GoGID。酶切鉴定表明:目的基因已经正确插入载体中,超表达载体构建成功。采用CaCl_2冻融法将重组载体转入农杆菌菌株中。以叶片为外植体,采用农杆菌介导的愈伤组织培养法,转化紫花苜蓿(Medicage sativa),得到抗性苗。对载体携带的nptⅡ基因、GUS基因进行PCR检测均成阳性,表明目的基因已成功导入紫花苜蓿基因组中。同时对转基因植株进行Southern-blot及RT-PCR检测,并均得到目的条带。本研究为进一步分析GoGID基因对紫花苜蓿生物量影响奠定了基础。
- 李俊温红雨高洪文Dzyubenko NikolayChapurin Vladimir王学敏
- 关键词：东方山羊豆紫花苜蓿
- 一种MsSPL13基因及其应用
- 本发明公开了一种MsSPL13基因及其应用，涉及生物技术领域，MsSPL13基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，MsSPL13蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，本发明通过应用MsSPL13基因或Ms...
- 马琳王学敏高洪文庞永珍温红雨
- 文献传递
